1.2.2 P-MSCs的低温保存与复苏 将体外培养扩增至第3代的P-MSCs用0.25%胰蛋白酶消化，加入完全培养基制成细胞悬液，1000 r/min离心5 min，加入冻存保护剂(90% FBS+10% DMSO)，采用程序降温仪进行梯度降温，细胞结晶后以1℃/min的速率至-40℃，然后以10℃/min速率至-80℃，最后转移至-196℃液氮罐内保存。P-MSCs于液氮深低温条件下保存6个月后，于41℃恒温水浴中迅速复苏，离心洗涤后加入完全培养基，置于37℃、5%CO2孵箱中培养，24 h后换液，此后2～3 d换液1次。低温保存6个月后复苏的第3代P-MSCs为实验组，未低温保存的第3代P-MSCs为对照组。

    1.2.3 低温保存对细胞增殖的影响 分别将实验组和对照组细胞用胰酶消化，制成细胞浓度为2×104个/mL的细胞悬液，接种于96孔板，每孔100 μL，置于37℃，5% CO2孵箱中培养。待细胞生长至对数生长期，加入CCK-8溶液10 μL/100 μL培养液，于培养结束时选择450 nm波长 ......