1 材料与方法

    1.1 标本来源

    收集2015年6月～2016年9月于第四军医大学西京医院泌尿外科手术治疗的患者152例，均为经尿道膀胱肿瘤电切手术治疗的非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌，获取肿瘤组织病理标本和癌旁正常膀胱组织标本，年龄51～72岁。根据WHO 2004非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌分级方法，其中组织学分级为低级别乳头状尿路上皮癌62例，高级别乳头状尿路上皮癌90例，均为初诊初治，无术前抗肿瘤史。152例患者的肿瘤标本作为实验组，癌旁正常膀胱组织作为对照组。实验中所使用的所有人体组织标本均经过第四军医大学第一附属医院药物临床试验伦理委员会审查。

    1.2 主要試剂

    兔抗TIMP-4多克隆抗体(美国Sigma公司)；免疫组化试剂盒；生物素标记的羊抗兔抗体；DAB显色试剂盒(北京中杉金桥公司)。

    1.3 实验方法

    免疫组织化学SP法：制作石蜡切片，选片。组织切片烤箱内烘烤30 min；用二甲苯浸泡脱蜡3次。自100%到70%梯度浓度的乙醇溶液依次浸泡5 min，用PBS洗片3 min×3次。灭酶活性：用0.3%甲醇-H2O2进行内源性过氧化物酶灭活，用PBS洗片3 min×3次。抗原修复：切片用浓度0.01 mol/L、pH 6.0的枸橼酸缓冲液煮沸10 min ......