慢病毒靶向携带Akt1 shRNA对胃癌细胞SGC—7901凋亡和增殖的影响(2)
1 材料与方法1.1 实验材料
人胃癌细胞SGC-7901购自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库。转染试剂Lipofectamine 2000,Trizol试剂和兔抗人Akt1、phospho-Akt(ser473)购自Invitrogen公司。鼠抗人bcl-2抗体购自Sigma公司、actin抗体和ECL发光剂购自美国Santa Cruz公司。RT-PCR试剂盒来自TOYOBO公司,引物由上海Invitrogen公司设计合成。Annexin V-FITC/PI双染试剂盒及磷酸化蛋白提取试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。
慢病毒载体系统:慢病毒载体系统由pGCL-GFP 载体、pHelper1.0(gag/pol 元件)载体、Helper2.0(VSVG 元件)载体3种质粒组成,其中pGCSIL-GFP 载体含有能持续表达shRNA 的元件,同时能表达绿色荧光蛋白GFP;pHelper1.0 和pHelper2.0含有病毒包装所必须的元件(上海吉凯基因化学技术公司) ......
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