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编号:13095092
慢病毒靶向携带Akt1 shRNA对胃癌细胞SGC—7901凋亡和增殖的影响(3)
http://www.100md.com 2017年10月8日 《中国医药导报》 2017年第17期
     1.2.6 流式双染法检测上述三种细胞凋亡情况 按试剂盒说明书进行操作,分别取S-LV-A、S-LV-C和SGC-7901细胞,0.25%胰酶消化,收集1×107个细胞,冷PBS缓冲液洗2次,重悬于1×结合缓冲液,调整细胞密度为1×107/mL。取100 μL细胞悬液至流式专用试管中,再加400 μL 1×结合缓冲液,再依次加入5 μL AnnexinV-F ITC标记液和10 μL PI标记液,混匀,室温避光孵育15 min后,上流式细胞仪检测,用MULTICYLE 110 DNA专用分析软件分析获得数据。

    1.2.7 生长速率检测 上述3种细胞经0.25%胰蛋白酶消化成单细胞悬液后,接种于6孔板,每种细胞接种7孔,每孔1×104个细胞,每日取1孔细胞进行计数,绘制细胞生长曲线。

    1.2.8 细胞克隆实验检测细胞的增殖能力 上述3种细胞经0.25%胰蛋白酶消化成单细胞悬液后,调整细胞密度为5×103/mL,接种至6孔板,10 d后,弃去培养液,固定、染色拍照,倒置显微镜下计数,大于50个细胞集落为1个克隆,根据公式计算克隆形成率:克隆形成率(%)=克隆数/5000×100%

    1.3 统计学方法

    采用统计软件SPSS 16.0对数据进行分析 ......
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