小鼠胆盐依赖脂肪酶蛋白原核表达载体的构建与蛋白制备(2)
1.1.2 试剂 EcoR I、Nde I 限制性核酸内切酶、T4 DNA连接酶、Taq DNA聚合酶、逆转录酶、dNTP、辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG购自上海碧云天生物技术有限公司;抗BSDL抗体购自Santa Cruz Biotechnology公司;卡那霉素、IPTG、DNA marker、BCA蛋白质量浓度测定试剂盒购自上海鼎国生物技术有限公司;protein marker、TRIzol RNA提取试剂、ECL化学发光试剂购自美国Thermo Scientific公司;PCR产物胶纯化回收试剂盒和质粒小提试剂盒购自天根生化科技有限公司;其他生化试剂均为国产分析纯产品。1.2 实验方法
1.2.1 pET-28b-mBSDL原核表达载体的构建与鉴定 根据小鼠BSDL基因的DNA序列,设计一对扩增引物,上游引物为5'-CGCCATATGGCAAAGTTGGGGG?鄄CTG-3',下游引物为5'-ATAGAATTC TTAGAAGCCA?鄄ATGGTGG-3'。在引物两端分别插入EcoR I和Nde I的酶切位点和保护碱基 ......
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