2.4 重組mBSDL蛋白的纯化复性

    Western blot分析结果示纯化后杂蛋白去除。根据蛋白质标准判断，目的蛋白相对分子质量略小于70 kD，为67 kD，与预期蛋白大小相符(图6)。应用凝胶成像分析系统计算目的条带的灰度值，目的蛋白纯度约为98%。随后对复性的mBSDL进行测活，活性达到5.268 U/mL(30 s)，5.358 U/mL(60 s)。

    3 讨论

    分子克隆技术和原核表达系统是蛋白表达和生物合成最常用的方法[9]。本研究采用小鼠乳腺组织总RNA为模板，通过RT-PCR成功扩增出mBSDL基因编码区全长序列，定向插入pET-28b载体中，双酶切和测序均证实该重组质粒的正确性。成功构建了pET-28b-mBSDL原核表达载体，该研究所采用的pET表达系统利用T7启动子，融合6个组氨酸便于蛋白质纯化，操作相对方便、快捷、需时较短 ......