兔骨髓基质干细胞的培养与鉴定体系的建立(2)
1 材料与方法1.1 实验动物及试剂
选择SPF级新西兰大白兔12只[2月龄,体重2~2.5 kg,内蒙古自治区人民医院(以下简称“我院”)动物饲养中心提供,标准饲养,动物合格证号为XP2001332],实验动物的取得及手术方式通过我院伦理委员会批准。
胎牛低血清培养基DMEM、IMDM来自Sigma公司,青霉素与链霉素来源于上海新华治药厂(批号:201221,2012213),氯丙嗪为市售产品,NaCl等生化分析试剂为分析纯。
1.2 研究方法
1.2.1 原代兔骨髓基质干细胞的取材及分离培养
将6只新西兰大白兔采用空气栓塞的方式处死,消毒后取出两侧的股骨,选择肝素生理盐水进行冲洗,将冲出的骨髓细胞加入至容量为200 mL的专用IMDM培养液中,1500 r/min离心10 min,在沉淀物中加入IMDM培养液混匀继续进行培养,37℃继续培养,培养2 d后更换一半培养液,以后每隔2 d更换一半的培养液,等到7~8 d后进行传代培养。
1.2.2 骨髓基质干细胞特性观察与鉴定
选择处于对数生长期的骨髓基质干细胞制作细胞爬片 ......
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