微量生色底物法测定肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中抗Xa因子效价(2)
抗凝血酶溶液:精密称取抗凝血酶Ⅲ适量,加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液溶解制成1 IU/mL的抗凝血酶Ⅲ溶液。Xa因子溶液:精密称取Xa因子适量,加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液溶解并稀释制成0.4 IU/mL(7.1nkat)的溶液。
发色底物溶液(S-2765):精密称取发色底物适量,加蒸馏水溶解使成0.001 mol/L的溶液。
终止液:取25 mL冰醋酸加水至50 mL,制成50%(v/v)醋酸溶液。
1.3.2 抗Xa因子效价的测定 效价测定前,进行空白调节:以空白溶液(B)代替供试品溶液测定抗Xa因子效价,调整Xa因子溶液的浓度,使空白溶液在405 nm波长处的吸光度(A)值在0.8~1.0范围内。
分别取5 μL标准品溶液(S)、供试品溶液(T)及空白溶液(B),按浓度梯度顺次加入到96孔板中(B1、S1、S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4、T1、T2、T3、T4、S1、S2、S3、S4、B2) ......
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