1.3 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验

    采用液氮碾磨法将乳腺癌组织磨至粉末状，加入含蛋白酶抑制剂的细胞裂解液置于冰上充分裂解细胞15 min，4℃ 12000 r/min离心5 min，获取细胞总蛋白，用BCA试剂盒测定蛋白浓度，按照1∶1的比例加适量的上样缓冲液(loading buffer)，沸水浴煮10 min使蛋白变性，置于-80℃保存。制备SDS-PAGE凝胶，根据蛋白浓度计算出上样体积，加样。60 mA恒流电泳约1 h，转膜，封闭，MMRN2一抗过夜孵育(Abbexa，北京)，二抗(生物素标记山羊抗兔IgG 1∶10000)孵育，漂洗，经ECL试剂盒(BestBio，上海)显色，凝胶成像系统(BIO-RAD，美国)扫描处理。

    1.4 生物信息学

    运用Blast软件(http：//blast.ncbi.nlm.nih. gov/Blast.cgi)设计MMRN2的引物。采用Kaplan-Meier plotter软件(http：//kmplot.com/analysis/index.php？p=service&cancer=breast)预测MMRN2表达高低与乳腺癌患者预后的关系 ......