消痰散结方对结肠癌干细胞样细胞凋亡的影响及相关机制研究(2)
1 材料与方法1.1 细胞株
HCT116人结直肠癌细胞株,购自中国科学院上海生科院细胞库。培养条件37℃、5%CO2;培养基为含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 pg/mL链霉素的McCoy′s 5A培养基;用含0.01% EDTA的0.25%胰酶进行消化传代,细胞处于对数生长期后用于实验。
1.2 药物
消痰散结方由天南星、法半夏、全蝎、蜈蚣、鸡内金、茯苓、山慈菇、蚤休、枳实、陈皮、白芥子、炙甘草12味中药组成,中药饮片购自上海雷允上公司,第二军医大学附属长征医院制剂室水蒸醇提法制备浸膏,原药材浓度为3.35 g/mL。消痰散结方冻干粉末保存液制备[9]:将消痰散结方浸膏在超净水中稀释5倍,16 000 r/min,离心半径20 cm,离心10 min,取上清液,-80℃制备冻干粉末,称重,溶解在细胞培养液中制备保存液,0.22 μm膜过滤,保存液药物浓度为10 mg/mL(原药材浓度为0.22 g/mL) ......
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