1.2.3 NF-κB P65 mRNA和蛋白的表达 ①采用RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达水平。转染24 h后，按照TRIzol提取试剂盒说明书提取各组细胞的总RNA，使用ELx808酶标仪检测总RNA的浓度和纯度，按照M-MLV逆转录试剂盒说明书进行逆转录，以cDNA为模板进行PCR扩增，其中NF-κB p65的引物参照Zhang等[7]实验：上游引物5′-GGGAAGGA？鄄ACGCTGTCAGAG-3′；下游引物5′-TAGCCTCAGGG？鄄TACTCCATCA-3′，扩增片断204 bp；内参照β-actin上游引物5′-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3′，下游引物5′-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3′，扩增片断132 bp。PCR扩增条件为95℃ 5 min，95℃ 30 s，56℃1 min，72℃ 45 s，30个循环，72℃ 10 min。取PCR产物10 μL琼脂糖(浓度为1.5%)凝胶电泳，以Bio-Rad凝胶电泳成像仪摄像，以β-actin为内参，以目的基因灰度值与β-actin灰度值的比值计算目的基因片段的相对表达量。②采用Western blot检测NF-κB p65蛋白的表达 ......