1.2.3.3 阳性克隆PCR鉴定 挑取单个菌落至鉴定体系中(2×Taq Plus Master Mix 10 μL，上游和下游引物各0.5 μL，DdH2O 9.0 μL)，混匀后采用PCR鉴定。上游引物：GGGTCAATATGTAATTTTCAGTG，下游引物：CGTCGCCGTCCAGCTCG ACCAG。反应条件为：94℃ 3 min，94℃ 30 s、55℃ 30 s、72℃ 30 s×22循环，72℃ 5 min。阳性克隆结果测序分析。

    1.2.4 质粒转染及慢病毒收获[11]

    ①制备DNA转染液：GV367载体20 μg、pHelper 1.0载体15 μg、pHelper 2.0载体10 μg、Lipofectamine 2000混匀后调整总体积为1 mL，室温下孵育15 min；②将以上混合液滴加至无血清培养基预处理2 h的293T细胞中培养；③6 h后PBS清洗3次 ......