1.2 方法

    1.2.1 细胞培养与分组 使用1640培养基培养人肝癌细胞HepG2，培养基含10%胎牛血清。培养条件：37℃，5%CO2。每1～2天进行细胞换液，当细胞融合度达80%～90%时，进行细胞传代、细胞冻存或用于后续实验。实验分为空白对照组、空质粒组和ATF4质粒组。

    1.2.2 ATF4过表达质粒的构建及质粒DNA提取 ATF4过表达质粒由上海吉凯基因化学技术有限公司构建，载体名称为GV362。元件顺序：CMV-MCS-3FLAG-IRES-EGFP-SV40-Neomycin；克隆位点：XhoI/BamHI；对照编号：CON236。ATF4过表达质粒构建好后，对目的基因进行阳性克隆测序分析，证明成功构建ATF4表达质粒。以LB粉剂加入一级水配制成LB液，高压蒸汽滅菌备用。细菌操作台内将卡那霉素加入上述LB培养液中。以含质粒(ATF4或空质粒)的菌液分别加入LB培养液中，37℃、180 r/min摇床上震荡培养16 h。按质粒小提试剂盒中操作说明进行提取纯化质粒用于后续实验。

    1.2.3 细胞转染 HepG2细胞按106个/孔接种于6孔板中 ......