脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂参考品的制备及标定(2)
离心机,水浴锅,隔水式恒温培养箱,二氧化碳培养箱,酶标仪。1.4 中和抗体实验
待测样品(1∶4稀释)经56℃灭活30 min后,加至96孔板中,50 μL/孔,作2倍系列稀释后,分别与100 CCID50的IPV病毒悬液于37℃中和2 h;加入(2~3)×105个/mL的Hep-2细胞悬液,100 μL/孔,置37℃、5%CO2培养箱中培养7 d。将能抑制50%细胞病变的最高稀释度定为IPV抗体的中和效价,并以稀释倍数的倒数表示。每次试验均设病毒回滴试验,回滴结果在32~320 CCID50/孔时,试验判为成立。以中和效价≥8判为中和抗体阳性。
1.5 酶联免疫吸附测定(ELISA)竞争法
标化参考品使用本实验室制备的脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒(ELISA法)检测,最低检出量参考品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型均以1∶2、1∶4、1∶8及1∶16,在板上作2倍系列稀释;每型别阴参10份,每份1孔;阳参10孔,每份1孔;每型别精密性参考品1份,连加10孔。待测样品20 μL/孔,设阴性3孔、阳性2孔、空白1孔 ......
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