1.2.4 Western blot检测细胞膜P-gp及核转录因子-κB P65(NF-κB P65)的表达 实验分组：①MG-63组；②MG-63/ADM组；③MG-63/ADM+CMC组(CMC 50、100、200 μmol/L，48 h)。蛋白提取步骤：①PBS洗细胞3次；②加入裂解缓冲液(1.5×106个细胞大约加入100 μL裂解液)，冰上放置20 min；③收集裂解液；④12 000 r/min离心2～10 min；⑤吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-80℃备用。蛋白提取裂解液采用胞浆和胞核蛋白提取试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。蛋白浓度检测用BCA蛋白检测试剂盒按操作说明进行测定。电泳方法：①配制10%的SDS-PAGE胶；②将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀后加Loading buffer后直接上样，样品两侧的泳道用等体积的1×Loading buffer上样，Marker采用1×Loading buffer调整至与样品等体积；③用恒流30 mA电泳至目的蛋白泳动至距胶下缘1 cm以上结束(约1 h)；④转膜：采用湿转法，恒流100 mA过夜转膜，将P-gp及NF-κB p65蛋白转到PVDF膜。随后进行封闭剂杂交：将膜移至含有封闭液的平皿中，室溫下脱色摇床上摇动封闭1 h，而后加入单克隆小鼠抗P-gp抗体(1∶500)、多克隆兔抗NF-κB p65抗体(1∶400)和单克隆小鼠抗β-actin抗体(1∶1000) ......