1 材料与方法

    1.1 材料

    菌株和质粒pET28a载体、DH5α菌株、大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)、Taq酶、XhoⅠ、EcoRⅠ内切酶以及T4连接酶、蛋白Marker均购自TaKaKa公司，质粒提取及琼脂糖凝胶回收试剂盒、镍离子亲和层析(Ni2+-NTA)预装柱、化学发光显色试剂均购自OMEGA公司，鼠抗人Anti-6×His抗体、辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗小鼠IgG均购自浩天生化科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 Caveolin-1基因扩增 根据Caveolin-1基因序列设计其上下游引物，并进行PCR反应，取PCR产物5 μL进行琼脂糖凝胶电泳。上下游序列如下：上游引入EcoRⅠ酶切位点，下游引入XhoⅠ酶切位点。正向引物(P1)：5′-ACATAAATTTTTTTCTCCAAATTAC-CTGAGTGTCAAGGTGTACGGACCCCTCCGAAGTGT-TAGTACCTCC-3′；反向引物(P2)：5′-TATTTTCGAT-GTCTCACTCTGCATGGGGCACTGGGCAGCCACAGA-AGTGAGGGTGCCATTGCTCTGCTTG-3′ ......