肺结核患者T辅助细胞、NKT细胞、NK细胞水平与疾病发展及预后的关系(1)
[摘要] 目的 研究肺结核患者T辅助细胞、自然杀伤T细胞(NKT细胞)、自然杀伤细胞(NK细胞)水平与疾病发展及预后的关系。 方法 选取2015年12月～2016年12月四川大学华西广安医院(以下简称“我院”)收治的肺结核病患者100例，选取同期我院体检的健康者100例;根据初诊、复诊、结核菌素情况将其分为四组(Ⅰ～Ⅳ组分别为初诊肺结核组、复诊肺结核组、结合菌素阳性健康组、结合菌素阴性健康组)。使用流式细胞仪检测四组治疗前外周血T细胞、NKT、NK细胞表达率。 结果 与Ⅲ组比较，Ⅰ组患者NKT细胞表达率显著升高，差异有统计学意义(P < 0.05)，两组T细胞及NK细胞表达率差异无统计学意义(P > 0.05);与Ⅳ组比较，Ⅰ组患者NKT细胞表达率显著升高，差异有统计学意义(P < 0.05)，两组T细胞及NK细胞表达率差异无统计学意义(P > 0.05);与Ⅰ组比较，Ⅱ组患者T细胞表达率显著升高，差异有统计学意义(P < 0.05)，但两组NKT细胞及NK 细胞表达率差异无统计学意义(P > 0.05);Ⅲ组及Ⅳ组在T细胞、NK、NKT细胞表达率差异无统计学意义(P > 0.05)。Ⅰ组患者中轻症、中症及重症亚组T细胞表达率差异有统计学意义(P < 0.05)，表达率：重症>中症>中轻症。三个亚组的NKT细胞及NK细胞表达率差异无统计学意义(P > 0.05)。100例肺结核患者治疗后均随访6个月，2例痰菌复阳，1例病灶恶化，其余均未复发。 结论 初诊患者T细胞表达水平与健康者相当，与疾病严重程度相关。复诊患者T细胞表达率明显升高。活动性结核患者中NKT细胞表达增加。因此，NK、T细胞测定可辅助诊断活动性结核。
[关键词] 肺结核;T辅助细胞;NKT细胞;NK细胞;预后
[中图分类号] R521 [文獻标识码] A [文章编号] 1673-7210(2019)01(a)-0098-04
当结核分枝杆菌侵入人体时，可激活人体先天性及适应性免疫防御反应，反应强度与症状呈正相关[1]。一些患者感染结核分枝杆菌后立即变为活动性结核病，但大多数患者体内感染结核菌会处于终身潜伏感染状态[2]。自然杀伤细胞(NK细胞)主要参与先天性免疫，T辅助细胞主要参与适应性免疫，自然杀伤T细胞(NKT细胞)为新型的免疫细胞，主要特征为CD3和CD56双阳[3]。NKT细胞具有NK细胞及T细胞的双重表型功能，可作为先天性和适应性免疫反应的连接纽带[4]。其作用靶点为结核分枝杆菌胞壁的磷酯酰肌醇甘露糖，当NKT细胞被激活后，可分泌γ干扰素(INF-γ)，抑制结核菌正常活动，并分泌具有杀伤作用的颗粒素[5]。肺结核患者免疫作用复杂，本研究探讨了肺结核患者T辅助细胞、NKT细胞及NK细胞的表达，旨在分析上述细胞对结核病诊治及预后的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2015年12月～2016年12月四川大学华西广安医院(以下简称“我院”)收治的肺结核病患者100例，包括61例初诊患者和39例复诊患者。所有患者均符合《临床诊疗手册(结核病分册)》[6]的诊断标准。经痰抗酸杆菌涂片检验确诊为肺结核，且人类免疫缺陷病毒(HIV)呈阴性。其中男73例，女27例;年龄17～70岁，平均(41.6±6.7)岁。另选取同期我院体检且X线胸片未见异常的健康者100例。其中56例结核菌素皮试阳性，44例阴性。根据初诊、复诊、结核菌素情况将其分为四组，各组的基本资料：①初诊肺结核组(Ⅰ组)：共61例，其中男42例，女19例;年龄19～68岁，平均(40.2±5.5)岁。根据患者的肺部病变、空洞、发热等症状，由2位医生根据《结核病的诊断标准和分类(续1)临床与X线表现》[7]将患者分为轻症、中症及重症亚组，分别有15、22、24例。②复诊肺结核组(Ⅱ组)：共39例，其中男31例， 女8例;年龄23～71岁，平均(42.6±6.0)岁。③结核菌素阳性健康组(Ⅲ组)：共56例，其中男21例，女35例;年龄21～67岁，平均(34.7±5.1)岁。④结核菌素阴性健康组(Ⅳ组)：共44例，其中男16例，女28例;年龄20～67岁，平均(38.9±6.4)岁。四组在治疗前的一般资料比较，差异无统计学意义(P > 0.05)，具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准，所有入选者均知情同意并签署知情同意书。
1.2 纳入及排除标准
1.2.1 纳入标准 ①符合结核病诊断标准，经检测证实为肺结核;②同意参与并签署知情同意书。
1.2.2 排除标准 ①合并糖尿病、免疫系统相关疾病、肿瘤;②痰培养为非结核分枝杆菌;③合并严重疾病;④孕期或哺乳期妇女;⑤HIV感染者及AIDS患者;⑥未收集到完整资料。
1.3 方法
使用EPICS XL流式细胞仪(Beckman Coulter公司，美国)检测治疗前四组的外周血T细胞、NKT、NK细胞表达率。住院第1天清晨采集5 mL空腹肝素钠抗凝血，进行荧光标记，取100 μL全血与CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE抗体室温下反应20 min，OptiLyse C溶血素溶血，磷酸盐缓冲液(PBS) 洗涤重悬细胞，流式细胞仪待测。使用EPICS XL SystemⅡTM Version 3.0，分析淋巴细胞的前向散射(FS)与侧向散射(SS)细胞分群，在相应的直方图或散点图中读取CD阳性表达率。
1.4 统计学方法
采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用ANOVA，以P < 0.05为差异有统计学意义。, 百拇医药(李利娟)
[关键词] 肺结核;T辅助细胞;NKT细胞;NK细胞;预后
[中图分类号] R521 [文獻标识码] A [文章编号] 1673-7210(2019)01(a)-0098-04
当结核分枝杆菌侵入人体时，可激活人体先天性及适应性免疫防御反应，反应强度与症状呈正相关[1]。一些患者感染结核分枝杆菌后立即变为活动性结核病，但大多数患者体内感染结核菌会处于终身潜伏感染状态[2]。自然杀伤细胞(NK细胞)主要参与先天性免疫，T辅助细胞主要参与适应性免疫，自然杀伤T细胞(NKT细胞)为新型的免疫细胞，主要特征为CD3和CD56双阳[3]。NKT细胞具有NK细胞及T细胞的双重表型功能，可作为先天性和适应性免疫反应的连接纽带[4]。其作用靶点为结核分枝杆菌胞壁的磷酯酰肌醇甘露糖，当NKT细胞被激活后，可分泌γ干扰素(INF-γ)，抑制结核菌正常活动，并分泌具有杀伤作用的颗粒素[5]。肺结核患者免疫作用复杂，本研究探讨了肺结核患者T辅助细胞、NKT细胞及NK细胞的表达，旨在分析上述细胞对结核病诊治及预后的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2015年12月～2016年12月四川大学华西广安医院(以下简称“我院”)收治的肺结核病患者100例，包括61例初诊患者和39例复诊患者。所有患者均符合《临床诊疗手册(结核病分册)》[6]的诊断标准。经痰抗酸杆菌涂片检验确诊为肺结核，且人类免疫缺陷病毒(HIV)呈阴性。其中男73例，女27例;年龄17～70岁，平均(41.6±6.7)岁。另选取同期我院体检且X线胸片未见异常的健康者100例。其中56例结核菌素皮试阳性，44例阴性。根据初诊、复诊、结核菌素情况将其分为四组，各组的基本资料：①初诊肺结核组(Ⅰ组)：共61例，其中男42例，女19例;年龄19～68岁，平均(40.2±5.5)岁。根据患者的肺部病变、空洞、发热等症状，由2位医生根据《结核病的诊断标准和分类(续1)临床与X线表现》[7]将患者分为轻症、中症及重症亚组，分别有15、22、24例。②复诊肺结核组(Ⅱ组)：共39例，其中男31例， 女8例;年龄23～71岁，平均(42.6±6.0)岁。③结核菌素阳性健康组(Ⅲ组)：共56例，其中男21例，女35例;年龄21～67岁，平均(34.7±5.1)岁。④结核菌素阴性健康组(Ⅳ组)：共44例，其中男16例，女28例;年龄20～67岁，平均(38.9±6.4)岁。四组在治疗前的一般资料比较，差异无统计学意义(P > 0.05)，具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准，所有入选者均知情同意并签署知情同意书。
1.2 纳入及排除标准
1.2.1 纳入标准 ①符合结核病诊断标准，经检测证实为肺结核;②同意参与并签署知情同意书。
1.2.2 排除标准 ①合并糖尿病、免疫系统相关疾病、肿瘤;②痰培养为非结核分枝杆菌;③合并严重疾病;④孕期或哺乳期妇女;⑤HIV感染者及AIDS患者;⑥未收集到完整资料。
1.3 方法
使用EPICS XL流式细胞仪(Beckman Coulter公司，美国)检测治疗前四组的外周血T细胞、NKT、NK细胞表达率。住院第1天清晨采集5 mL空腹肝素钠抗凝血，进行荧光标记，取100 μL全血与CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE抗体室温下反应20 min，OptiLyse C溶血素溶血，磷酸盐缓冲液(PBS) 洗涤重悬细胞，流式细胞仪待测。使用EPICS XL SystemⅡTM Version 3.0，分析淋巴细胞的前向散射(FS)与侧向散射(SS)细胞分群，在相应的直方图或散点图中读取CD阳性表达率。
1.4 统计学方法
采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用ANOVA，以P < 0.05为差异有统计学意义。, 百拇医药(李利娟)