不同冻存时间对人颗粒脂肪活性影响的实验研究(3)
1.2.6 肌酸激酶测定比较脂肪细胞活力 ①取颗粒脂肪0.5 mL,加生理盐水1.5 mL,放入组织研磨器内,在冰水浴内进行组织研磨,破碎脂肪细胞。②研磨后的脂肪组织匀浆,离心5000 r/min,离心2 min,吸取离心后的中层液0.25 mL,加入0.25 mL生理盐水稀释。③将CK试剂盒中试剂一至试剂五按比例混合后37℃预温5 min,取20 μL待测样本加入300 μL混合试剂,混匀后37℃水浴20 min。④加入100 μL试剂六,混匀,3500 r/min离心10 min。⑤取离心后上清液300 μL,加入配置好的定磷液2000 μL。⑥37℃水浴下于2 min后吸取1000 μL于96孔板(每孔100 μL,每孔设3复孔)于酶标仪630 nm下测定OD值,比较各组酶活力大小。1.2.7 HE染色 (1)冰冻切片的制备:①固定。向盛有脂肪组织标本的冻存管中加入PFA至最大刻度处,水平摇床震荡20 min。②脱水。吸出PFA,加入等体积15%蔗糖溶液,震荡2~3 h后换30%蔗糖溶液震荡12 h。③包埋。OCT包埋剂浸没包埋组织块 ......
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