1.3 主要试剂

    Genistein(美国Sigma公司);17β-雌二醇(17β-E2，美国Sigma);ICI182，780(美国Sigma);小牛血清白蛋白(BSA，美国Sigma);孕马血清促性腺激素(PMSG，天津华孚高新生物技术公司);Trizol(美国Invitrogen公司);BcaBESTTM RNA PCR试剂盒(大连Takara Nilestriol公司);PCR引物(上海英骏生物有限公司)。

    1.4 实验分组及处理

    未成年大鼠颈后皮下注射PMSG，60 U/只，48 h后急性断头处死，立刻剥离出双侧卵巢，针刺卵泡充分释放出颗粒细胞，过滤、冲洗、离心后，用新鲜配制的DMEM/F12培养液(含青、链霉素)调整细胞浓度至3×105/mL。细胞悬液分装至6孔培养板，37℃的5%CO2培养箱中培养48 h后，分别加入不同浓度Genistein(GEN)、17β-E2及ICI182 ......