1.3 计算机模拟分子对接

    RCSB PDB蛋白数据库获得EpCAM晶体结构(PDB ID：4MZV)。Discovery Studio 3.5软件进行SNF*与EpCAM的模拟对接。

    1.4 siRNA干扰和EpCAM基因转染

    EpCAM干扰序列如下，siRNA1：5′-GCCGUAA-ACUGCUUUGUGATT-3′，5′-UCACAAAGCAGUUUA-CGGCTT-3′；siRNA2：5′-GACAAGGACACUGAAAU-AATT-3′，5′-UUAUUUCAGUGUCCUUGUCTT-3′；对照序列为：5′-CUAGCUAGGTTUCCAUTCCTT-3′，5′-AUCGCCUTTCGGUAUAUTCTT-3′。转染试剂为Lipofectamine 3000(Thermo Fisher)。EpCAM的DNA编码区由上海吉玛公司合成，转染质粒为pcDNA3.1。突变型EpCAM序列是将预测的SNF*结合位点删除的序列 ......