1.5 ELISA 检测IL-4和IFN-γ表达水平

    根据厂家说明书，严格按照实验流程检测血清和BALF中IL-4和IFN-γ的表达水平。

    1.6 Western blot检测pSTAT1和STAT1蛋白水平

    蛋白上清液用考马斯亮蓝方法检测总蛋白含量，加入SDS loading buffer煮沸5 min，取50 mg蛋白上样，10%SDS PAGE分離总蛋白并电转移至硝酸纤维素膜(PVDF)上；用脱脂奶粉封闭PVDF膜后，用1∶1000稀释倍数的pSTAT1、STAT1和GAPDH抗体(均用TBST稀释)杂交，TBST反复清洗3次后，用1∶5000稀释倍数的羊抗IgG杂交，TBST反复清洗3次后，超敏ECL化学发光显像，凝胶图像分析系统扫描各蛋白条带的灰度值，以GAPDH作为内参蛋白。

    1.7 统计学方法

    采用SPSS16.0软件进行分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，各组数据采用One-way ANOVA分析，进一步组间两两比较采用Tukey法进行，以P < 0.05作为差异统计学有意义。

    2 结果

    2.1 五组血清和BALF中IFN-γ及IL-4水平的比较

    末次激发后次日 ......