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编号:13379807
椎间隙感染后持续腰背痛的机制研究(2)
http://www.100md.com 2019年5月5日 《中国医药导报》 2019年第13期
     1.2 金黄色葡萄球菌上清液处理髓核细胞

    将于-20℃冰箱保存的金黄色葡萄球菌的国际标准菌株ATCC25923取出,复温后种植于普通肉汤培养基(TSB)中。以37℃为发酵温度,摇匀培养20 h,3%为接种标准。使用分光光度计(Evolution 60,Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,USA)将悬液TSB稀释至4×107 CFU/mL。4℃ 10 000 g(r = 6.3 cm)离心15 min,其上清液用0.22 μm硝化纖维膜收集和过滤并在4℃储存。简言之,P2和P4髓核细胞分别用0%(DMEM/F12含10%胎牛血清和抗生素)、10%、20%和30%、40%金黄色葡萄球菌上清液处理,每3天更换1次培养基。

    1.3 细胞增殖实验

    使用CCK-8试剂盒检测细胞活性。将髓核细胞P2以2000细胞/孔接种在96孔板中培养24 h,然后将培养基去除,以0%(DMEM/F12含10%胎牛血清和0.02%抗生素)、10%、20%、30%、40% 浓度的金黄色葡萄球菌上清液替代 ......
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