1.3.4 蛋白提取和Western blot检测目标分子蛋白表达水平的变化 收集细胞于1.5 mL EP管中，PBS清洗2遍。每管细胞(106个)加100 μL裂解液，用超声破碎仪裂解。4℃ 12 000 r/min离心15 min。收集上清，BCA法测蛋白定量。

    配制10%聚丙烯酰胺凝胶。电泳至溴酚蓝指示剂到达预制胶底部，停止电泳。蛋白转膜至NC膜，5%脱脂奶粉中室温封闭1 h。一抗(GAPDH：1∶5000;β-actin：1∶5000;GAPDH：1∶5000;Sig-1R：1∶200;CaN：1∶200;IP3R：1∶500)4℃孵育过夜;TBST洗膜10 min，连续3次;二抗(1∶8000)室温孵育1 h，TBST洗膜10 min，连续3次。ECL化学发光，凝胶成像仪进行扫膜成像，image J软件进行图像分析，分析蛋白灰度值，以GAPDH为内参。

    1.3.5 Furu-2 AM法测定不同处理组H9c2细胞的Ca2+含量 大鼠H9c2心肌细胞系细胞经不同处理分组培养48 h后，依据试剂盒说明操作。用D-Hank′s溶液洗涤细胞3次 ......