第7天时使用0.05%胰酶0.5 mL消化转导仙台病毒的细胞，1 mL羊水细胞培养基(常温)终止细胞消化，最后全部转至EP管(15 mL)，1000 r/min离心5 min，去除上清液后再次悬浮细胞，将其接种于Feeder上，细胞密度为2×104、4×104个。从第2天开始用iPSCs培养液替掉羊水细胞培养基，每天更换培养液，第8天既可隔日在显微镜下观察克隆体形成与否。转导仙台病毒3～4周后，选择物理方法挑选克隆生长的具备核仁明显以及边界清晰的单细胞集落，在覆盖基质胶(matrigel)或Feeder的培养皿中接种培养。

    1.2.5 iPSCs的培养以及传代

    iPSCs在37℃、5%CO2的培养箱中培养4～5 d后，借助体视学显微镜及1 mL注射器针头把克隆体分成多个小细胞团块，将其以1∶4的比例接种于包被饲养层或覆盖matrigel的培养皿中。前5代的细胞传代均选择机械切割法。从第6代开始，当细胞汇合度≥80%时，使用分散酶(dispase)或0.5 mmol/L乙二胺四乙酸二钠(Ethylenediamine tetraacetate disodium ......