重型α-地中海贫血胎儿羊水源诱导多能干细胞的建立及鉴定(4)
2 结果2.1 重型α-地贫胎儿羊水中细胞的培养结果
置于37℃、5% CO2培养箱培养7 d后的重症α-地贫胎儿羊水细胞长成了几个相对独立的细胞小岛。更换培养液2 d后,细胞生长更加旺盛形成多个细胞集落。细胞汇合度达到70%~80%时可按1:4传代羊水细胞,后者整體生长形态似梭形或者不规则三角形,细胞核呈现卵圆形,见图1。
2.2仙台病毒诱导下重新的编程结果
4种转录因子(Sox2、Klf4、c-Myc 及Oct3/4)通过仙台病毒介入第2代羊水细胞中。羊水细胞的胚胎干细胞样克隆现象会出现在转导的第4天。胰酶消化转导第7天的羊水细胞,而后以2×104、4×104个的密度接种,转导后陆续可见克隆样生长细胞(第9天),清晰界限位于克隆与周围饲养层细胞间(第13天),见图2A;克隆体越来越大,紧密排列的细胞间存在无法忽视的核仁且核浆比高,与周围饲养层细胞边限清楚(第20天),见图2B。1 mL注射器针头将克隆体切割接种传代,一部分在Matrigel包被的4孔板中;一部分在饲养层细胞包被的培养皿中,此过程各自使用无动物血清的mTeSR1培养基以及iPSC培养基培养 ......
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