1.4.3 水芹总酚酸对DHBV DNA聚合酶活性的影响

    1.4.3.1 DHBV DNA聚合酶的提取 雏鸭注射DHBV病毒强阳性血清，7 d后取肝，肝匀浆之后利用蔗糖浓度梯度法纯化获得DHBV DNA聚合酶，提取流程如下：取感染DHBV的鸭肝，匀浆;11 000 r/min，4℃离心30 min后取上清;上清45 000 r/min，4℃，离心3 h得到沉淀物;沉淀物用蔗糖浓度梯度离心，按不同的蔗糖浓度分层取出液体;各部分45 000 r/min，4℃，离心10 h得到沉淀，提取物放入-80℃保存。

    1.4.3.2 DHBV DNA聚合酶活性检测 将通用引物Oligo(dT)15溶于100 mmol/L的1-甲基-咪唑的盐酸缓冲液中，加入96孔NH酶标板中，与水溶性碳化二亚胺混匀，于50℃水浴中反应4 h，反应结束后用洗液(50 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5)洗三遍，除去未结合的Oligo(dT)15，将包被后的96孔板置于4℃保存。实验设水芹总酚酸各浓度药液、DHBV DNA聚合酶对照组和阴性对照液。水芹总酚酸各浓度药液分别加入到用磷酸缓冲盐液(PBS)洗过的96孔培养板中 ......