由于ELISA技术成熟稳定，实验操作灵活简便，在血清蛋白生物标志物的研究中被广泛应用。在PubMed数据库中，以“ELISA”或“enzyme-linked immunosorbent assay”为关键词检索，发现近5年的相关文献5万余篇，足见其应用之广。在应用中研究者也不断尝试改进技术以提高ELISA的灵敏度和可重复性。凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)主要由A、B两个亚基构成，在血液中FⅩⅢ以非共价键的四聚体复合物(A2B2)的形式存在，FⅩⅢ四聚体检测对于凝血障碍疾病的诊断、预防和治疗具有重要意义。Katona等[7]依据FⅩⅢ四聚体的特性建立一种快速的一步夹心ELISA检测法，在血浆稀释液中加入生物素化单克隆捕获抗体(针对B亚单位)和过氧化物酶标记单克隆标记抗体(针对A亚单位)，通过测定过氧化物酶活性来定量链霉亲和素包被微板上的复合物的数量。实验中只有FⅩⅢ四聚体反应，未配位的A或B亚基无反应，该测定法具有高度灵敏(可检测到正常水平1%的表达量)和良好可重复性(批间变异系数为2%～3.3%)，且没有与游离的非复合物交叉反应。Dixit等[8]通过共价交联方式将单克隆抗体固化在3-氨基丙基三乙氧基硅烷功能化的微孔板表面 ......