siRNA干扰Annexin A7对宫颈癌细胞株Ki67和P16的影响(2)
1 材料与方法1.1 仪器试剂及细胞株
共聚焦激光显微镜(Zeiss,LSM800);化学发光及荧光影像分析仪(日本富士公司,FUJIFILM LAS4000);Ki67和P16免疫荧光试剂盒购于上海生物工程股份有限公司(生产批号:E607238、ESK6322);Annexin A7 siRNA试剂盒(美国Invitrogen公司产品,LipofectamineTM 2000);宫颈癌细胞株Hela细胞来自河北医科大学医学遗传学教研室。
1.2 siRNA干扰效率的测定
将Hela细胞培养于25 mL的培养瓶中,DMEM培养基,10%胎牛血清,置入培养箱,37℃、5%CO2。转染前1 d种植细胞于6孔板中,密度为(1~2)×105/孔;250 μmol/L DMEM培养基中加30 pmol siRNA,250 μmol/L DMEM培养基中加5 μL Lipofectamine转染试剂,两者混合,轻轻混匀,室温静置约20 min;将细胞分成3组:siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组;吸掉6孔板中的DMEM培养基 ......
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