1.5 倒置显微镜观察

    观察细胞贴壁时间、细胞生长形态、原代生长周期。待细胞长到80%～90%时，用胰酶消化传代。

    1.6 人输卵管妊娠绒毛滋养细胞的鉴定

    将第4次传代的滋养细胞，计数板计数，以2×106个/mL的浓度接种于激光共聚焦皿中，24 h后，用PBS清洗，加入4%多聚甲醛，室温下固定15 min。PBS洗3次后，用0.1%曲拉通X-100增加细胞膜通透性，PBS洗涤细胞3次，加入5%牛血清白蛋白(BSA)室温封闭1 h;去血清后滴加1∶1混合的异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗人细胞角蛋白18(CK18)、荧光素(CY3)标记抗人波形蛋白各25 μL，4℃孵育过夜。次日取出后复温，用PBS重复洗涤细胞3次后滴加DAPI染核，避光室温下染色后加入PBS冲洗3次，激光共聚焦显微镜检测该体外培养的细胞角蛋白和波形蛋白的表达情况。

    2 结果

    2.1 滋养细胞一般形态

    原代培养滋养细胞接种后于倒置显微镜下可见大量圆形细胞悬浮存在，1 h后细胞开始慢慢贴壁，有个别细胞开始伸展，24 h后可明显见大部分细胞已经贴壁，48 h后大部分细胞伸展，到第9、10天细胞的数量明显变多 ......