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编号:13818300
血管内皮生长因子原核表达载体的构建及表达(1)
http://www.100md.com 2020年8月15日 《中国医药导报》 202023
     [摘要] 目的 构建血管内皮生长因子(VEGF)原核表达载体并诱导其表达蛋白,为后续进行VEGF相关研究奠定基础。 方法 通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到目的片段,将DNA片段克隆至带组氨酸标签的pET-30a(+)载体上;构建的重组质粒经过菌液聚合酶链式反应(PCR)及测序方法鉴定;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒表达,通过蛋白质印迹法(Western blot)进行鉴定。 结果 以HepG2细胞为模板扩增出大小正确的片段;构建的pET-30a-VEGF重组质粒经菌液PCR及DNA测序证实序列正确;考马斯亮蓝染胶和Western blot结果显示IPTG诱导表达的融合蛋白分子量正确且条带单一。 结论 成功构建pET-30a-VEGF原核表达质粒,后续可进行大量诱导表达用于肝癌的诊疗相关研究。

    [关键词] 血管内皮生长因子;肝细胞癌;基因克隆;原核表达

    [中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2020)08(b)-0004-04

    [Abstract] Objective To construct a prokaryotic expression vector containing vascular endothelial growth factor (VEGF) and induce to express protein ......
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