一种基于RNA-seq验证的人肾癌细胞和正常细胞原代培养方法(3)
2.2 细胞转录组测序结果3株HPTEC的基因表达谱如下图所示(图2A,封三)。测序结果提示HPTEC和HRTC均表达近端肾小管上皮的标志物,均未见明显远端肾小管上皮相关标志物表达(图2B,封三)。分析HRTC与HPTEC的基因表达谱,两种细胞差异基因的表达与文献报道的肾癌和正常肾组织的差异基因的表达相符合(图2C,封三)[9-11]。如在HRTC内高表达的基因有:CA9、VEGFA、APLN、ALDH1A1、C4A、C4B、ENPP3、NDUFA4L2等。在HRTC内低表达的基因有:VHL、PBRM1、MAL、SLIT2、GATA3、TFAP2B、TFCP2L1等(图2C,封三)。
2.3 免疫细胞化学检测与碱性磷酸酶检测
所培养的HPTEC表达Pan-CK和PAX8蛋白,而没有α-SMA和Vimentin的蛋白表达(图3,封三)。碱性磷酸酶染色(偶氮偶联法)中可见HPTEC和HRTC胞浆内发现大量棕红色颗粒形成。提示原代细胞碱性磷酸酶含量丰富(图4A~B,封三)。
2.4 透射电镜细胞超微检测
收集第2代HPTEC和HRTC送检透射电镜 ......
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