雪莲有效成分的提取及含量测定
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摘 要：目的：测定新疆雪莲花中多糖和总黄酮的含量。方法：用可见分光光度标准曲线法测定含量，并对数据进行统计分析。结果：总黄酮的平均含量是2.05%；多糖的平均含量是5.06%。
关键词：雪莲花；雪莲多糖；雪莲总黄酮；可见分光光度法
中图分类号：R282.5 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2007)10-042-02
雪莲花类药材为菊科风毛菊属(Saussurea DC)用作生药的多种植物的全草或地上部分，始见于藏药文献《月王药物》，清代《本草纲目拾遗》也有记载，是西藏、新疆、青海、甘肃、云南、四川等高原寒带地区常用的民族药和民间药[1]。本文所要探讨的新疆雪莲(Saussurea Involucrata Kar.et Kir. ex Maxim)即为其中一种，主要分布于我国新疆的天山和昆仑山高山区。民间以全草入药，性温，味微苦，入肝、脾、肾三经，具有活血通经、散寒除湿、强筋助阳等功效，用于治疗风湿性关节炎、肺寒咳嗽、小腹冷痛、闭经、胎衣不下、阳萎等疾患。药理试验表明，新疆雪莲具有消炎、镇痛及终止妊娠的作用，而总黄酮是消炎镇痛的有效成分。文献报道，黄酮是雪莲中的重要成分，具有祛痰和类似维生素P的作用，能降低毛细血管通透性，且具有抗病毒、抑制醛糖还原酶的作用。黄酮类、多糖类化合物与多种药理活性相联系，在护肤保健、防治心血管疾病、治疗风湿疼痛症、延缓衰老、抗癌和计划生育等方面开发利用潜力大[2，3]。因此，对雪莲中黄酮类、多糖的含量测定具有十分重要的意义。
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1 材料与仪器
1.1 材料
干燥雪莲花(黄河药市)，芦丁对照品(中国药品生物制品检定所)。
1.2 仪器
721分光光度计(上海第三分析仪器厂制造)，超声波提取仪(上海必能信超声有限公司，SB2200-T)，电子秤等。
2 方法与结果
精密称取芦丁对照品200mg，置于100ml的量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10.00ml置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，备用(每lml中含芦丁0.20mg)。
2.1 总黄酮的测定(比色法)
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2.1.1 对照品溶液的制备
2.1.2 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00ml，分别置于25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%NaNO2溶液10ml，使混合，放置6min，加10% Al(NO3)3溶液1ml，摇匀，放置6min，最后加4%NaOH 10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以第一瓶作空白，于510nm波长处测定吸收度是：0.099、0.203、0.311、0.408、0.512、0.624，以浓度C与吸收度A进行直线回归，得回归方程A=-0.0045+0.013C，r=0.9998。
2.1.3 供试样品含量测定 取雪莲花粉末于70℃干燥6h，精密称取1.00g，于锥行瓶中加12倍量蒸馏水进行超声提取[4]60min，分离药液和药渣，药渣于锥行瓶中加10倍量蒸馏水进行超声提取45min，分离药液和药渣，合并两次药液，加95%的乙醇，静置沉淀，进行二次抽滤，将沉淀加蒸馏水溶解置50ml的容量瓶中待测含糖量(1号、2号、3号)；将滤液放入100ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，待测总黄酮含量(1号、2号、3号)。
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精密吸取雪莲提取液5.00ml置于25ml容量瓶中，按标准曲线项下的方法操作，自加水至“6ml”起按要求测定吸收度，以回归方程计算供试液中总黄酮含量，并进一步换算成雪莲花药材的总黄酮含量。
2.1.4 含量测定结果(见表1)
2.2 多糖的含量测定(苯酚-硫酸法)
2.2.1 含量测定的原理 苯酚-硫酸比色法测定多糖的原理，是多糖被浓硫酸水合产生的高温迅速水解成单糖，在强酸性条件下，与苯酚反应生成橙色衍生物。它在490nm处有最大吸收，其吸光度与浓度呈线性关系[5]。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥恒重的葡萄糖标准品100mg，溶解并定容100ml，则其浓度为1mg/ml。
2.2.3 标准曲线制备 精密吸取标准贮备液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml，均定容100ml，分别取1.00ml，各加入苯酚液1.00ml，迅速滴加浓硫酸5.00ml(硫酸占总体积71.4%)，另以1.00ml水同上操作，作为空白液。再将其置于40℃水浴中恒温放置0.5h，取出，冷却15min后，于490nm处测其吸光度值，分别为0.046、0.125、0.240、0.380、0.510，得回归方程A=0.01312C-0.01534，r=0.9995。[6]
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2.2.4 含量测定结果(见表2)
3 讨论
雪莲多糖和总黄酮是中药雪莲花所含的主要有效成分，其含量高低直接影响到药材质量和临床疗效。据文献报道，总黄酮具有消炎镇痛、抗风湿、抗癌等作用；雪莲多糖具有终止妊娠、消除自由基、抗疲劳以及增强机体免疫功能的作用。前人多以总黄酮为指标进行研究和质量控制，而本次课题以雪莲多糖为主要研究对象，兼顾总黄酮。实验结果表明，超声波提取雪莲多糖含量高达5.06%，总黄酮含量仍达到2.05%。因此，建议在以后研究和制药中，以总黄酮含量测定为指标的同时，也应考虑雪莲多糖的含量，将雪莲多糖含量也作为质量控制指标之一。
参考文献：
[1] 李君山，蔡少青.雪莲花类药材的化学和药理研究进展[J].中国药学杂志，1998，33(8)：449.
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[2] 万明.天山雪莲花开发前景[J].新疆中医药，2004，22(4)：61.
[3] 赵莉，王晓玲.新疆雪莲的化学成分、药理作用及其临床应用[J].西南民族大学学报自然科学版，2003，29(4)：424-428.
[4] 朱晨.野生与种植雪莲花的总黄酮含量比较[J].中国中医药杂志，2002(2)：37.
[5] 梁生旺.中药制剂分析[M].北京：中国中医药出版社，2002.
[6] 张广强.分析化学(第三版)[M].北京：学苑出版社，2001.
Extraction and Determination of the Available Contents in Saussurea Involucrate
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Abstract：Objective：To determine the content of polysaccharide and the whole flavones in Saussurea involucrate. Methods：The content of polysaccharide was analysed by at 490 nm and the contents of the whole flavones at 510 nm. Results：The average content of polysaccharide was 5.07% and the average content of the whole flavones 2.06%.
Key words：Saussurea nvolucrate；Polysaccharide；The whole flavones；Vis-spectrophotometric method, http://www.100md.com(徐 娟 彭晓霞)