咳喘宁颗粒质量标准研究
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摘 要:目的:对咳喘宁颗粒进行质量标准研究。方法:采用薄层色谱法对咳喘宁颗粒进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对咳喘宁颗粒中的盐酸麻黄碱进行含量测定。结果: 盐酸麻黄碱的线性范围为0.668～4.008μg，平均回收率为100.83%。结论:此方法可行，重复性好，能有效地控制咳喘宁颗粒的质量。
关键词：咳喘宁颗粒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法
中图分类号：R927.11文献标识码：A文章编号：1673-2197(2007)11-044-04
咳喘宁颗粒为《中华人民共和国卫生部药品标准•中药成方制剂》第20册收载品种，编号为WS3-B-3898-98[1]。由麻黄、紫苑、百部(蒸)、甘草、苦杏仁组成，功能为止咳化痰，用于伤风咳嗽，急、慢性支气管炎。本品以中药千古名方三拗汤为基础化裁加减而成，以麻黄为君药，苦杏仁、甘草为臣使药，我们在原质量标准的基础上，增加了甘草有效成分甘草次酸、苦杏仁有效成分苦杏仁苷的薄层鉴别项目及麻黄有效成分盐酸麻黄碱的含量测定项目，以进一步有效控制咳喘宁颗粒的产品质量。
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1 仪器和材料
(1)试验仪器为P200II高效液相色谱仪，由大连依利特科学仪器有限公司制造。
(2)药品与试剂。对照品及对照药材购于中国药品生物制品检定所；所用试剂均为分析纯或色谱纯。咳喘宁颗粒为自制。
2 实验方法和结果
2.1 薄层色谱鉴别[2]
2.1.1 苦杏仁的薄层色谱鉴别
取本品10g，研细，加水25 ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，用水饱和的正丁醇萃取5次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，将正丁醇液蒸干，残渣加水5ml微热使溶解，放冷，通过上端填有2g中性氧化铝(100～200目)的D101型大孔吸附树脂(100～200目，10g，内径2cm，湿法装柱，加水20ml预洗一次)，弃去水液，用氨试液(4→100)30ml洗脱，弃去氨液，再用水10ml洗脱，弃去水液，继续用20%乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。按处方取不含苦杏仁的其它药材，依照本品制备工艺和供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。依照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2000年版一部附录VI B)进行试验，分别吸取上述供试品溶液12μl，对照品溶液6μl，阴性对照溶液12μl点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)5～10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，立即喷以磷钼酸硫酸溶液(磷钼酸2g，加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀)，在105℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显现相同颜色的斑点，阴性无干扰，如图1。此法简单、灵敏度高、重现性好、专属性强。
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2.1.2 甘草的薄层色谱鉴别
取本品30g，研细，加水40ml使之溶解，加盐酸6ml与三氯甲烷60ml，加热回流1.5小时，放冷，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加甲醇制成每 1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按处方取不含甘草的其它药材，依照本品制备工艺和供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显现相同颜色的斑点，且阴性均无干扰，如图2。此法简单、灵敏度高、重现性好、专属性强。
2.2 盐酸麻黄碱含量测定[2-3]
2.2.1 色谱条件与系统适用性试验
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用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.08mol•L-1磷酸二氢钾溶液 (10∶90)(用三乙胺调PH=6.8)为流动相，检测波长:205nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于4000。
2.2.2 对照品溶液的制备
取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加0.1mol/L的盐酸溶液制成每1ml含67μg的溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备
取本品约5g，研细，精密称定，加水40ml使之溶解，置分液漏斗中，加浓氨试液5ml，用乙醚振摇提取5次(分别为40，40，40，30，30ml)，合并乙醚液，加盐酸乙醇溶液(1→20)10ml，混匀，低温回收溶剂至干，残渣加乙醇5ml和0.1mol/L盐酸溶液适量使溶解，转移至25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
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2.2.4 乙醚提取次数的考察
分别取本品约5g，研细，精密称定，加水40ml使之溶解，置分液漏斗中，加浓氨试液5ml，考察振摇提取3次、4次、5次、6次的情况。其余操作过程按供试品溶液制备方法制备，再分别按前文含量测定方法操作，进样量为10μl，测定峰面积值并比较结果。
根据乙醚提取结果显示，提取5次峰面积大，而提取6次峰面积与提取5次无明显变化，因此，将乙醚振摇提取次数定为5次。
同时，我们比较了在乙醚振摇提取次数为5次的情况下，每次振摇提取时加乙醚量对峰面积大小的影响，提取5次(40，40，40，30，30ml)和提取5次(40，40，40，40，40ml) 峰面积无明显变化，因此，将乙醚振摇提取次数定为5次(40，40，40，30，30ml)。
2.2.5 线性关系的考察
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分别精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液(C=0.334mg•ml-1)2、4、6、8、10、12μl，分别进样，记录色谱图，测定各峰面积，结果见表1。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，求得回归方程Y=13766.16X+2701.43，r=0.9993。
说明盐酸麻黄碱在0.668～4.008μg范围内，进样量与盐酸麻黄碱峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.2.6 阴性干扰试验
参照《中华人民共和国卫生部药品标准•中药成方制剂》第20册，制得咳喘宁颗粒缺麻黄药材的阴性样品，按前文方法进行处理，得盐酸麻黄碱阴性供试品溶液，按照正文盐酸麻黄碱含量测定方法进行测定，在与盐酸麻黄碱对照品溶液对应的保留时间处，盐酸麻黄碱阴性供试品溶液无吸收峰，表明阴性无干扰。
, http://www.100md.com 2.2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液各10μl，按前文样品测定方法操作，在0、2、4、6、8h时间间隔分别进样，测定色谱峰面积，得出峰面积积分值，盐酸麻黄碱峰面积值的RSD值为0.24%，试验结果表明，样品供试液在8小时内稳定性良好。
2.2.8 精密度试验
取同一供试品溶液，分别精密吸取10μl，连续进样5次，测定谱峰面积，盐酸麻黄碱峰面积值的RSD值为0.19%，试验结果表明精密度良好。
2.2.9 重复性试验
取同一批号样品(批号20040901)5份，按供试品溶液制备方法制备，分别按含量测定方法操作，进样量为10μl，测定峰面积值并计算含量， RSD值为1.67%，试验结果表明重复性良好。, 百拇医药(曾宗浪 章常华 施宏斌 李圣刚 王德春)