RP-HPLC法同时测定腰痛宁胶囊中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量
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摘 要：目的：同时测定腰痛宁胶囊中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。方法：采用高效液相色谱法，Agilent C18色谱柱，乙腈-0.02mol/L NaH2PO4(含0.2%三乙胺，0.4%磷酸)溶液(6∶94)为流动相；检测波长为207nm。结果：方法学考察结果表明，本研究建立的分析方法有较好的重现性和稳定性。盐酸麻黄碱平均回收率为101.38%，RSD为2.02%(n=6)，盐酸伪麻黄碱平均回收率为101.24%，RSD为2.25%(n=6)。结论：本法操作简便、结果准确，可用于该制剂中麻黄药材的质量控制。
关键词：腰痛宁胶囊；RP-HPLC；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱
中图分类号：R284.1
文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)05-033-03
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腰痛宁胶囊为常用中成药，是国家中药保护品种。主要成分有马钱子、麻黄、乳香等数十种名贵中草药。具有消肿止痛，疏散寒邪，温经通络的功效[1]。因麻黄除医疗功效作用外，还有一定的毒副作用，在制剂过程中须严格控制其含量[2]。但目前针对麻黄的质量控制多对其中的盐酸麻黄碱进行含量测定[3]。不同产地的麻黄药材，其中的麻黄碱和伪麻黄碱含量差别很大，且伪麻黄碱也具有一定的治疗和毒副作用，因此有必要开发一种方法，同时对麻黄药材中的麻黄碱和伪麻黄碱同时进行质量控制。
1 仪器、试药与样品
仪器：waters 2695高效液相色谱仪。
试剂：乙腈(色谱纯，fisher公司)，磷酸二氢钠、三乙胺、磷酸(分析纯，北京化工厂)，超纯水(Milli Q 超纯水，过0.2μm微孔滤膜)。
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对照品：盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所购置，批号：171237-200505，供含量测定用)。盐酸伪麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所购置，批号：111242-200405，供含量测定用)。
样品：腰痛宁胶囊(河北承德颈复康药业集团股份有限公司提供，批号：20070513、20070519、20070522)。
2 含量测定
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent HC-C185μ(4.6×250mm)，柱温：25°C；以乙腈-0.02mol/L NaH2PO4(含0.2%三乙胺，0.4%磷酸)溶液(6∶94)为流动相；流速：1mL/min。
2.2 对照品溶液的制备
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取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱适量，精密称定，加甲醇制成每mL含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分别为76.2μg 和32.9μg。
2.3 供试品溶液的制备
取本品适量，取出胶囊中药物，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入浓氨试液3mL使药物充分湿润后，再加入乙醇-乙醚(1∶3)混合溶液40mL，浸泡30min后于超声波仪器上超声提取60min，放冷，将乙醚提取液至蒸发皿中，加1%盐酸甲醇溶液4mL，50℃水浴蒸干，残渣加1%盐酸甲醇溶液使溶解，转移至10mL量瓶中，用1%盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照试验
用除麻黄药材外的其它药材的处方量，照工艺要求制备阴性对照品，按质量标准正文中含量测定项下进行高效液相色谱试验，所得阴性对照色谱图中，在腰痛宁胶囊色谱图中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰的出峰位置上未出现吸收峰，表明处方中其它药材对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量测定无影响(见图1～3)。
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图1 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品溶液色谱
图2 腰痛宁胶囊溶液色谱
图3 腰痛宁胶囊阴性样品溶液色谱
2.5 线性关系的考察
精密吸取浓度为76.2μg/mL的盐酸麻黄碱和32.9μg/mL盐酸伪麻黄碱对照品溶液2，5，8，10，15，20μl，注入液相色谱仪，按“2.1”色谱条件分析，测定各自峰面积，以对照品进样量(μg)对峰面积值进行回归，求得盐酸麻黄碱回归方程：y=2345106x -117828 R2 =0.9989，盐酸伪麻黄碱回归方程：y=2463715x-30739，R2= 0.9991。结果表明盐酸麻黄碱在0.1524～1.524 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，盐酸伪麻黄碱在0.0658～0.658 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
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2.6 精密度试验
取同一批号(20070522)样品，研细，取约1g，精密称定，按照“2.3”供试品溶液制备方法操作，按“2.1”色谱条件分析，连续进样6次，测定各自盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积，测得峰面积值的RSD为1.54%和0.34%(n=6)，表明精密度良好。
2.7 重现性试验
取同一批号(20070522)样品，研细，取约1g(共6份)，精密称定，按照“2.3”供试品溶液制备方法操作，按“2.1”色谱条件分析，测定每份样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量。结果样品中盐酸麻黄碱平均含量为0.8399mg/g，RSD为2.03%(n=6)，盐酸伪麻黄碱平均含量为0.2608mg/g，RSD为2.50%(n=6)。
2.8 稳定性试验
, 百拇医药 取同一批号(20070522)样品，研细，取约1g，精密称定，按照“2.3”供试品溶液制备方法操作，按“2.1”色谱条件分析，分别在0、2、4、8、12、24小时，测定各自样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积，测得峰面积值的RSD为1.80%和0.59%(n=6)，说明供试品溶液中的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在24小时内稳定。
2.9 回收率试验
取同一批号(20070522)样品，取0.5g(共6份)，精密称定，分别加入盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱混合对照品0.38mg和0.172mg，称定重量，按照“2.3”供试品溶液制备方法操作，按“2.1”色谱条件分析，测定样品中含量，计算回收率，结果盐酸麻黄碱平均回收率为101.38%，RSD为2.02%(n=6)，盐酸伪麻黄碱平均回收率为101.24%，RSD为2.25%(n=6)，符合要求。结果见表1，表2。
2.10耐用性试验
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(1)不同色谱柱的耐用性：按“2.1”色谱条件，使用Agilent HC-C18柱5μm (4.6mm×250mm)和AllsphereODS-25μ(4.6×250mm)对腰痛宁胶囊溶液进行色谱分析，测试结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱达到基线分离，说明色谱柱耐用性好。
(2)不同仪器的耐用性：按“2.1”色谱条件，用AllsphereODS-25μ(4.6×250mm)色谱柱，分别采用Agilent1100series与Waters 2695高效液相色谱仪，按照“2.1”色谱条件分析，测试结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱达到基线分离，说明色谱柱耐用性好。
2.11 样品含量测定
分别取3个批号样品，按照“2.3”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件测定各自样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量。结果见表3，表4。
, 百拇医药 3 讨论
供试品提取方法的选择：在提取过程中，参考《中国药典》2005年版麻黄[4]提取，但因过中性氧化铝柱对加样回收影响较大，从而影响含量测定，故优化提取方式，考察了超声提取和索氏回流，结果无显著差别，超声提取操作较为简便，故采用超声提取方法。另外因盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱易挥发，在提取过程中应控制样品温度在60°C以下。
提取溶剂的选择：本实验使用了甲醇、乙醇、乙醚以及乙醇和乙醚的不同比例的混合液多种溶媒提取，结果显示，提取溶剂为乙醇-乙醚(1：3)混合溶液最好。
流动相的选择：曾有报道使用离子液体[5]可以极其方便分离出盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱，但该离子液体难以获取，同时该方法不便于推广。参考《中国药典》2005年版麻黄项的流动相[4]，进行试验，反复摸索，最终选定乙腈-0.02mol/L NaH2PO4(含0.2%三乙胺，0.4%磷酸)溶液(6：94)为流动相，样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰形较好，与其它组分均可达到基线分离，空白对照亦无干扰。本实验结果表明，用本文HPLC法同时测定腰痛宁胶囊中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，方法灵敏度高、专属性强、重现性好，可有效控制腰痛宁胶囊中麻黄质量。
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参考文献：
[1] 新药介绍.腰痛宁胶囊简介[J].山东医药，2004，44(10).
[2] 丁丽丽，施松善等.麻黄化学成分与药理作用研究进展[J].中国中药，2006，31(20).
[3] 郭东艳，史亚军等.HPLC测定复方麻黄止咳颗粒中盐酸麻黄碱的含量[J].陕西中医，2005，26(4).
[4] 国家药典委员会编.中国药典(I部)[S].北京：化学工业出版社，2005.
[5]Lijun He，Wenzhu Zhang et.al.Effect of1-alkyl-3-methylimidazolium—based ionic liquids as the eluent on the separation of ephedrines by liquid chromatography[J].Journal of Chromatography A，1007 (2003) ：39~45.
(责任编辑：王尚勇), http://www.100md.com(艾 立 罗国安)