玄丹巴布剂的毒理学研究
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摘 要：目的：考察玄丹巴布剂经皮用药的安全性。方法：参照《中药新药研究指导原则》，采用最大给药量试验观察皮肤给药后，动物短期内出现的急性、毒性反应及其程度；结合一般情况观察与组织病理学检查，综合判断动物贴敷部位的局部组织和乳腺刺激性反应；对豚鼠皮肤多次局部贴敷致敏，观察其过敏反应。结果：药物贴敷给药后对大鼠的最大给药量为6g/kg，短期内均未见毒性反应及死亡情况；局部刺激性实验中，动物一般状况良好，未发生全身反应甚至死亡情况；对豚鼠皮肤多次刺激，致敏试验显示药物对豚鼠皮肤无明显致变态反应作用。结论：玄丹巴布剂对家兔皮肤无明显刺激性及毒性作用，其临床使用安全、可靠。
关键词：玄丹巴布剂；刺激性；急性、毒性；变态反应
中图分类号：R965 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)06-030-02
玄丹巴布剂是在膏剂的基础上改进而来，由丹参、淫羊藿、延胡索、三七、海藻等药组成，具有活血化瘀、消肿止痛等功效。该药局部外敷治疗乳腺增生，临床疗效显著[1]。为了保证玄丹巴布剂临床使用的安全、有效，我们参照《中药新药研究指导原则》[2]，对其急性、毒性、皮肤刺激性以及过敏反应进行系统性实验研究。采用最大给药量试验，观察动物在短期内出现的急性、毒性反应及其程度；结合一般情况观察与组织病理学检查，综合判断是否发生相关局部刺激性反应；对豚鼠皮肤多次局部贴敷给药致敏以观察其过敏反应，从而客观评价其可能存在的毒性，为其临床应用提供安全性参考依据。
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1 材料与方法
1.1 动物
大耳白家兔70只，体重2.0~2.5kg；健康白色豚鼠30只，体重250~300g，均由中国医科大学实验动物中心提供。
1.2 试药
玄丹巴布剂，给药剂量分别为6g/kg，4g/kg，2g/kg，批号：20051123；巴布剂赋形剂，批号：20051121。均由本院制剂室提供。
1.3 家兔皮肤急性、毒性试验
将42只家兔随机分为7组，即赋形剂组、完整皮肤的玄丹巴布剂高、中、低剂量组及破损皮肤的玄丹巴布剂高、中、低剂量组。每组6只，雌雄各半。用10%硫化钠给家兔背部脱毛，去毛面积约150cm2，破损皮肤的制作采用消毒铁锉划破(以渗血为度)。去毛后将受试药玄丹巴布剂贴于脱毛区，低剂量组以临床用制剂2g/kg、中剂量组4g/kg、高剂量组为6g/kg，并用无刺激性胶布加以固定，每只动物分笼饲养，给药24h后去除玄丹巴布剂，去除玄丹巴布剂后1、24、48、72h至第七日，每日观察并记录动物的体重、皮毛光泽、饮食、眼和粘膜的变化，呼吸中枢、神经系统、四肢活动和死亡情况，并于7日后处死家兔，解剖观察其心、肝、脾、肺、肾等脏器的变化。
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1.4 家兔皮肤刺激性试验
取28只成年健康大耳白家兔，雌雄各半，将家兔腹部用10%硫化钠脱毛，脱毛面积大约150cm2。将大耳白家兔随机分为7组，即完整皮肤高、中、低剂量组和破损皮肤高、中、低剂量组以及赋形剂组，每组4只。破损皮肤的制作采用砂纸磨损，并作“#”字形切口(以渗血为度)。去毛后动物腹部分别贴敷玄丹巴布剂高剂量组6g/kg、中剂量组4g/kg、低剂量组2g/kg，对照组贴敷赋形剂对照，并用无刺激胶布加以固定，贴药后24h摘下巴布剂，清洗干净，观察动物的一般状态、行为、体征及局部皮肤有无红斑和水肿、脱屑、结痂等反应，并观察是否有色素沉着、皮肤粗糙或菲薄等情况。然后，连续贴药4周，每天贴敷时间为8h，每天重复上述观察皮肤反应，停药后再观察一周。观察结束后，取贴敷部位的局部组织和乳腺做组织病理学检查。
1.5 豚鼠皮肤变态反应试验
取健康白色豚鼠30只，雌雄各半，用10%硫化钠将豚鼠背部两侧对称脱毛，去毛面积3×3cm2。将豚鼠按体重、性别随机分成三组，每组10只，第一组给玄丹巴布剂，第二组给赋形剂对照组，第三组阳性对照组，阳性致敏物用2、4-二硝基氯代苯配成1%的致敏浓度和0.1%激发浓度(用70%酒精配制)。
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(1)致敏接触：脱毛24h，取玄丹巴布剂0.2g贴敷在豚鼠左侧脱毛区，并以无刺激胶布固定封闭，持续6h，第7天和第14天以同样方法重复一次。赋形剂对照组(给予赋形剂)与阳性对照组(1%的致敏浓度)方法同上。
(2)激发接触：于末次给玄丹巴布剂致敏后14d，将玄丹巴布剂0.2g贴敷于豚鼠背部左侧脱毛区，阳性对照用0.1% 2、4-二硝基氯代苯，空白对照用赋形剂，6h后去掉受试药物，即刻观察，并于24、48、72h再观察有无过敏反应，并按表记录各时间过敏反应分值并判定结果 。
2 结果
2.1 家兔皮肤急性、毒性试验
玄丹巴布剂在低剂量2g/kg、中剂量4g/kg和高剂量6g/kg外用时对完整皮肤家兔和破损皮肤家兔的行为、活动、饮食、皮毛光泽、呼吸中枢、神经系统和体重无任何不良影响，无一家兔死亡。7日后处死家兔，解剖观察其心、肝、脾、肺、肾等主要脏器未见异常。详细结果见表1。
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2.2 家兔皮肤刺激性试验结果
玄丹巴布剂高、中、低三个剂量组对家兔完整皮肤未发现红斑和水肿反应，对家兔破损皮肤也未发现明显的红斑和水肿反应，平均分值均小于0.5。组织学检查与空白对照组比较，其贴敷部位的局部组织的病理学检查无异常变化。对照《新药临床前研究指导原则》中《皮肤刺激性强度评分标准》，判定玄丹巴布剂多次给药对完整及破损皮肤均无刺激性(平均反应分值范围<0.50)。具体结果见表2。
2.3 豚鼠皮肤变态反应试验结果
玄丹巴布剂和赋形剂组均未见红斑及水肿等过敏现象，说明玄丹巴布剂对豚鼠皮肤无变态反应，详细结果见表3。
3 讨论
中药、天然药物制剂急性毒性、刺激性及皮肤过敏性的实验研究是新药临床前安全性评价的重要组成部分。安全、有效是临床用药的关键，随着制药工业科技的飞速发展，新技术、新材料改变了中药制剂的物质基础和给药方式，带来一些传统中药制剂所未曾发生的安全性问题，玄丹巴布剂采用新型的水溶性高分子材料，同时加入了促透剂及交联调节剂等成分，作为基质与药物提取液混合制成的外用贴剂，为了保障公众用药安全有效，防止意外用药事故或严重不良反应的发生，本文进行了玄丹巴布剂的毒理学研究、经皮肤急性毒性、过敏试验、皮肤刺激试验，观察动物破损皮肤短期内接触受试药物所产生的毒性反应；动物皮肤重复接触受试药物后，机体免疫系统在皮肤上的反应；动物完整皮肤及破损皮肤接触受试药物所产生的刺激反应等，证实其无毒、无皮肤过敏反应，对破损皮肤无不良刺激。经临床应用证明，其疗效确切，安全可靠，为该制剂开发成新药打下实验基础。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药政管理局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编[M].北京：人民卫生出版社，1994：204~208.
[2] 孙敬方.动物实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：191.
(责任编辑：姜付平), 百拇医药(孟 舒 关艳敏 刘婷立 唐兴丽)