神术散方不同提取物体内抗甲型流感病毒作用的研究
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(1.南京中医药大学药学院，江苏南京210046；2.江苏省方剂研究重点实验室，江苏南京210046；
3.南京中医药大学附属医院，江苏南京210029)
摘要：目的：观察神术散方中不同提取物抗甲型流感病毒的作用。方法：以甲型流感病毒(A/PR8/34)滴鼻感染小鼠，以利巴韦林作为阳性对照药，观察神术散方中不同提取物对小鼠病毒致小鼠死亡率等影响。结果：神术散方不同提取物对甲型流感病毒(A/PR8/34)感染小鼠具有不同程度的延长存活的时间作用，其中，羌活去油水提液的保护率为56.3%，加减甘草醇提物神术散方超临界提取物的保护率分别为50%和43.75%，与病毒模型组比较具有显著性差异(P<0.05)。而其混合挥发油对甲型流感病毒感染小鼠的保护率没有统计学意义。结论：神术散不同提取物均具有一定的体内抗流感病毒作用。
关键词：神术散；提取物；抗甲型流感病毒
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-2197(2008)10-0030-03
“神术散”方源于宋《杨氏家藏方》卷三[1]。并收载于宋代官修方书《太平惠民和剂局方》卷之二，它是由苍术、藁本、白芷、羌活、细辛、川芎、甘草等七味中药组成的复方，主治四时瘟疫，头痛项强，发热憎寒，身体疼痛及伤风鼻塞，声重，咳嗽头昏[2]，为历代医家治疗瘟病犯卫的经典方。为传承经典医方，研制防治流行性感冒现代中药成方制剂，本实验以甲型流感病毒滴鼻感染小鼠，观察神术散及其组成药味的不同提取物对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用。
1仪器与试剂
1.1仪器
超净工作台(苏州净化设备厂)，孵箱(上海分析仪器厂)，FA1004电子分析天平(上海天平厂)。
1.2药材
苍术为菊科植物北苍术Atractylodeschinensis(DC)Koidz.的干燥根茎，购自内蒙通辽；白芷为伞形科植物白芷Angelicadahurica(Fisch.exHoffm)Benth.etHook.f干燥根，购自四川；藁本为伞形科植物藁本LigusticumsinensisOliv的干燥根茎，购自四川；川芎为伞形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort的干燥根茎，购自四川；细辛为马兜铃科植物北细辛AsarumheterotropoidesFr.SChmidtvar.mandshuricum(Maxim)Kitag.干燥根及根茎，购自辽宁辽中；羌活为伞形科植物羌活NotopterygiumincisumTingexH.T.Chang的干燥根茎及根，购自四川资阳；甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch的干燥根及根茎，购自甘肃。以上药材均经南京中医药大学中药鉴定学教研室王春根教授鉴定。
1.3试剂
乙醚(南京试剂厂批号050107)；鸡红细胞(新鲜公鸡血，用生理盐水洗涤后备用)；氯化钠(太仓化工厂批号050722)；苦味酸(上海化学试剂药品供应站批号040221)；鸡胆(9~11日龄，南京中牧股份药械厂)。
1.4阳性对照
利巴韦林片(四川美大康药业股份有限公司，批号051101)。
1.5实验用病毒
甲型流感病毒A/PR8/34(H1N1)，由中国预防医学实验室病毒研究所提供。
1.6实验动物
ICR小鼠(由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证：苏动质97003)，随机分组，分笼饲养，自由饮水，喂全价颗粒饲料，室温22±2℃，湿度55%~65%。
2实验方法
2.1供试液的制备
2.1.1挥发油溶液的制备(I组~II组)
(1)混合挥发油(1)(I)：取苍术、白芷、川芎、藁本、羌活、细辛(过20目筛)按比例混合，共100g，按照《中国药典》2005年版一部附录XD挥发油测定法提取7h，提取后得到挥发油，用5‰CNC-Na配成每1mL含生药0.4g的混悬液。
(2)混合挥发油(2)(II)：苍术、白芷、川芎、藁本、羌活、细辛(过20目筛)各50g，按照《中国药典》2005年版一部附录XD挥发油测定法分别提取7h，提得的挥发油按比例混合，再用5‰CNC-Na配成每1mL含生药0.4g混悬液。
2.1.2油水混合液的制备(III组~V组)
(1)油水混合液(1)(III)：将混合挥发油组II与六味药材的水提混合液(取各药材提取挥发油后的水煎液，离心，取上清液，按比例混合，浓缩)混合，用5‰CNC-Na配成每1mL含生药0.4g混悬液。
(2)油水混合液(2)(IV)：将混合挥发油组II与六味药材混合水提液(取混合药材提取挥发油后的水煎液，离心，取上清液，浓缩)混合，用5‰CNC-Na配成每1mL含生药0.4g混悬液。
(3)油水混合液(3)(V)：将混合挥发油组I与六味药材混合水提液混合，用5‰CNC-Na配成每1mL含生药0.4g混悬液。
2.1.3水提液的制备(VI组~XI组)
(1)白芷去油水提液(VI)：除去挥发油的白芷水煎液，过滤，浓缩，浓缩液用5‰CNC-Na配成每1mL含生药012g混悬液。
(2)川芎去油水提液(VII)：除去挥发油的川芎水煎液，过滤，浓缩，浓缩液用5‰CNC-Na配成每1mL含生药012g混悬液。
(3)细辛去油水提液VIII：除去挥发油的细辛水煎液，过滤，浓缩，浓缩液用5‰CNC-Na配成每1mL含生药012g混悬液。
(4)羌活去油水提液(IX)：除去挥发油的羌活水煎液，过滤，浓缩，浓缩液用5‰CNC-Na配成每1mL含生药012g混悬液。
(5)苍术醇提药渣水提液(X)：取苍术药材80%醇提后的残渣，加8倍量水回流提取3次，每次2h，离心，合并上清液，浓缩。浓缩液用5‰CNC-Na配制成每1mL含药材0 ......
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