SYBR Green荧光定量PCR检测293A细胞UCP2基因表达方法的建立
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张昊 南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室;
【摘要】目的:建立验证293A细胞UCP2基因表达情况的SYBR Green荧光定量PCR方法。方法:2μg 293A细胞总RNA用于逆转录,所需的反应体系为20L,其中包含2μg RNA,1mM dNTP,1U/L RNA酶抑制剂,2.5pmol/L Olig(dT)18引物,0.5U/L AMV逆转录酶。PCR最佳反应条件为:95℃5min,95℃30s,60℃60s(40个循环),72℃延伸3min。结果与结论:根据溶解曲线分析,扩增产物中无引物二聚体的影响,说明所设计引物特异,退火温度合适。这表明本研究建立的SYBR Green荧光定量检测方法灵敏度高、定量范围广。
【关键词】 A UCP SYBR Green 荧光定量PCR
【分类号】R450
UCP2(Uncoupling Protein 2,解偶联蛋白2)是解偶联蛋白家族的成员,为一种位于线粒体内膜上的阳离子载体蛋白。它可以引起质子的渗漏,使氧化磷酸化解偶联,ATP合成减少,能量以热的形式散失[1]。UCP2介导了线粒体内膜的质子渗漏,这已被一系列的研究所证明,这些研究的对象涵盖了
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