羊栖菜多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响及其机制
培养液,活力,1材料与方法,2方法,3统计学分析,2结果,1SFPS对3T3-L1前脂肪细胞活力的影响,2SFPS对3T3-L1前脂肪细胞凋亡的影响,3SFPS对各组细胞中Bcl-2,Bax和Caspase
杨旭东 石 杰 杨骄霞 王桂云 宋高臣 张 杰*随着生活水平的提高,肥胖的发病率急剧增高,肥胖导致的代谢紊乱进一步引起的冠状动脉粥样硬化性心脏病、糖尿病、动脉粥样硬化、脂代谢紊乱等疾病增多[1]。脂肪组织不仅是重要的能量储存库,也是重要的内分泌器官,因此控制脂肪细胞的数目,抑制脂肪细胞过度分化,诱导脂肪细胞凋亡成为治疗相关疾病的靶点。食用海藻羊栖菜隶属于褐藻门、马尾藻属。羊栖菜多糖(sargassum fusiforme polysaccha- ride,SFPS)是羊栖菜主要成分之一,研究发现SFPS具有降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗衰老、抗凝血、抗疲劳等作用[2-4],但SFPS 对脂肪细胞增殖活性的影响及其机制未见报道。本研究就羊栖菜中多糖成分SFPS 对3T3-L1 前脂肪细胞的抑制作用进行分析,并初步探讨其作用机制,为SFPS 进一步应用提供一定的实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
细胞株:3T3-L1 前脂肪细胞购买于美国ATCC公司,在液氮中保存备用。
药品及试剂:DMEM 高糖培养液、Trizol 和胰蛋白酶购买于美国Gibco 公司,MTT 试剂盒购买于索莱宝有限公司;核苷酸引物购买于上海生工生物技术有限公司;Hoechst33258 试剂盒购买于百浩生物科技有限公司。
仪器:CO2恒温培养箱为德国Thermo 公司,酶标仪为美国Biotek 公司,倒置显微镜为德国Leica公司,凝胶成像系统为美国Bio-Rad 公司。
1.2 方法
1.2.1SFPS的制备用水煮醇沉法提取羊栖菜粗多糖[5],200 目粉碎羊栖菜,水煮3 次,95%乙醇沉淀,得到深褐色粗多糖,Sevag 法去除蛋白成分,经过SephadexG200 凝胶柱双蒸水洗脱纯化。苯酚-硫酸法测定多糖含量,测得提取的多糖含量为55.13%。
1.2.2 细胞培养根据参考文献[6],3T3-L1 前脂肪细胞37 ℃ 5% CO2培养于DMEM 高糖培养基(100 mg/L链霉素、100 IU/L 青霉素、10%胎牛血清) ......
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