大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养条件的优化研究
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晏丹 舒赛男 武汉科技大学医学院病理教研室 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科
【摘要】目的:建立和优化大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的分离培养条件,以获得群体均一、未分化状态保持良好的MSCs。方法:收集不同周龄大鼠骨髓细胞;以不同浓度Percoll密度梯度离心分离骨髓单个核细胞:以60%低糖DMEM 40%MCDB201为基础培养基,培养24h去悬浮细胞;以不同接种密度传代培养;碱性磷酸酶染色和油红O染色考察MSCs向骨和脂肪组织分化的潜能。结果:采用57%Percoll液的分离效果优于70%Percoll液。6周龄(体重约180g)大鼠能在细胞分离的质和量上达到最佳效果。24h进行悬浮细胞去除、5×10~3/cm~2接种密度传代培养,光镜和电镜显示MSCs增殖能力强,功能状态活跃,成脂成骨实验显示多向分化潜能保持良好。结论:优化大鼠周龄、分离液的密度、细胞培养条件及改进培养方法有助于获得多向分化潜能保持良好的均一的MSCs。
【关键词】 间充质干细胞 分离 培养 优化
【分类号】R329
前言间充质干细胞(MSCs)广泛分布于人体各种器官和组织，但最易得到、最富集和研究最多的是来源于骨髓[l]。骨髓MSCs是一种具有多向分化潜能的成体干细胞。它可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、神经细胞、肌键细胞、肝细胞等。由于其多分化潜能
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摘要 目的：建立和优化大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)的分离培养条件，以获得群体均一、未分化状态保持良好的MSCs。方法：收集不同周龄大鼠骨髓细胞；以不同浓度 Percoll 密度梯度离心分离骨髓单个核细胞；以 60%低糖DMEM40%MCDB201 为基础培养基，培养 24h 去悬浮细胞；以不同接种密度传代培养；碱性磷酸酶染色和油红O 染色考察 MSCs 向骨和脂肪组织分化的潜能。结果：采用57%Percoll 液的分离效果优于 70%Percoll液。6 周龄(体重约180g)大鼠能在细胞分离的质和32量上达到最佳效果。24h 进行悬浮细胞去除、5× 10 /cm 接种密度传代培养，光镜和电镜显示 MSCs 增殖能力强，功能状态活跃，成脂成骨实验显示多向分化潜能保持良好。结论：优化大鼠周龄、分离液的密度、细胞培养条件及改进培养方法有助于获得多向分化潜能保持良好的均一的MSCs。
关键词：间充质干细胞；分离；培养；优化
中图分类号:Q813.1+1 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)01-0037-03
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