hTERT启动子的克隆及在胃癌细胞中的转录活性研究
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曹伟军 张桂英 何青春 刘霆 中南大学湘雅医院消化内科 中南大学湘雅医院消化内科 中南大学湘雅医院消化内科 中南大学湘雅医院消化内科
【摘要】目的:克隆人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)核心启动子,研究hTERT启动子在人胃癌细胞SGC7901和正常人成纤维细胞HLF中的转录活性。方法:以Hela细胞的基因组DNA为模板,PCR扩增hTERT核心启动子片段,将其克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建hTERT-pGL3Basic表达载体。将该载体用脂质体转染法转染SGC7901和HLF细胞,检测hTERT启动子在这两种细胞中的转录活性。结果:成功克隆hTERT核心启动子;双酶切和PCR鉴定均显示hTERT-pGL3Basic表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示hTERT启动子在SGC7901细胞中的转录活性为阳性对照的21.5%,而在HLF细胞中无活性。结论:hTERT启动子具有肿瘤特异性,可以用于肿瘤的靶向基因治疗。
【关键词】 人端粒酶逆转录酶启动子 克隆 靶向基因治疗 胃癌
【分类号】R735.2
前言肿瘤基因治疗的靶向性一直是备受关注的问题，它与肿瘤基因治疗的安全性和有效性密切相关。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase，h犯RT)是端粒酶活性主要决定因素，在绝大部分肿瘤细胞中高表达，而在大部分正常体细胞中表达阴性114，因此hTERT启动
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摘要 目的：克隆人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)核心启动子，研究 hTERT 启动子在人胃癌细胞SGC7901 和正常人成纤维细胞 HLF中的转录活性。方法：以Hela 细胞的基因组DNA 为模板，PCR 扩增hTERT 核心启动子片段，将其克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic 构建hTERT-pGL3Basic 表达载体。将该载体用脂质体转染法转染 SGC7901和 HLF 细胞，检测hTERT 启动子在这两种细胞中的转录活性。结果：成功克隆 hTERT 核心启动子；双酶切和 PCR 鉴定均显示hTERT-pGL3Basic 表达载体构建成功；荧光素酶活性检测显示 hTERT 启动子在 SGC7901 细胞中的转录活性为阳性对照的21.5%，而在 HLF 细胞中无活性。结论：hTERT启动子具有肿瘤特异性，可以用于肿瘤的靶向基因治疗。
关键词：人端粒酶逆转录酶启动子；克隆; 靶向基因治疗；胃癌
中图分类号：R730.54 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)01-0090-02
注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”
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