双基因表达载体的构建及生物活性观察
胰高血糖素样肽-,防御素-,肠上皮细胞增殖,细菌黏附
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艾国平 谭虎 粟永萍 王涛 冉新泽 第三军医大学全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
【摘要】为了促进肠上皮细胞增殖、加速肠上皮机械屏障修复和防止肠源性感染的发生,利用分子克隆技术首先获得含胰高血糖素样肽-2(GLP-2)编码序列的高血糖素原cDNA片段,通过PCR重叠延伸技术成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽,同时将成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)定点突变为GGT序列(甘氨酸);并以我室保存的pcDNA3.1-HD-5-cDNA为模板克隆防御素-5(HD-5)信号肽及成熟肽序列,分别构建到双基因表达载体pVITRO3,转染肠上皮细胞并观察其对肠上皮细胞增殖活性和杀菌能力的影响,结果显示构建的pVITRO3-HD-5-GLP2双基因性表达载体具有促进肠上皮细胞增殖和抑制细菌增殖和黏附的作用。
【关键词】 胰高血糖素样肽- 防御素- 双基因表达载体 肠上皮细胞增殖 细菌黏附
【基金】国家自然科学基金重点项目(30230360) 面上项目资助(30470527)
【分类号】Q78
前言肠道是一个有菌的环境，生理状态下是否发生肠源性感染与肠道的机械屏障、猫膜免疫屏障和微生态屏障等密切相关，物理、化学等因素如肿瘤病人放化疗、大面积烧伤、药物中毒、辐射损伤等均可导致肠道屏障的破坏而发生肠源性感染，如何促进肠上皮再生修复和防止肠源性感染
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摘要：为了促进肠上皮细胞增殖、加速肠上皮机械屏障修复和防止肠源性感染的发生，利用分子克隆技术首先获得含胰高血糖素样肽-2(GLP-2)编码序列的高血糖素原cDNA片段，通过PCR重叠延伸技术成功拼接GLP2 的信号肽及成熟肽，同时将成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)定点突变为GGT序列(甘氨酸)；并以我室保存的pcDNA3.1-HD-5-cDNA为模板克隆防御素-5(HD-5)信号肽及成熟肽序列，分别构建到双基因表达载体pVITRO3，转染肠上皮细胞并观察其对肠上皮细胞增殖活性和杀菌能力的影响，结果显示构建的pVITRO3-HD-5-GLP2 双基因性表达载体具有促进肠上皮细胞增殖和抑制细菌增殖和黏附的作用。
关键词：胰高血糖素样肽-2；防御素-5；双基因表达载体；肠上皮细胞增殖；细菌黏附
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