重组腺相关病毒介导的大鼠脂联素载体的构建与鉴定
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【摘要】目的:克隆大鼠脂联素基因(Acrp30),并对载有脂联素的重组腺相关病毒(AAV)载体进行构建及鉴定。方法:根据Acrp30的基因序列设计引物,上游引入EcoRⅠ位点,下游引入SalⅠ位点,以EX-A0242-M01-Acrp30为模板扩增目的基因。将Acrp30基因克隆入pUC19载体中,获得重组质粒pUC19-Acrp30。然后用EcoRⅠ与SalⅠ酶切pUC19-Acrp30及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-Acrp30,EcoRⅠ/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。结果:PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-Acrp30重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的Acrp30基因正确。结论:脂联素病毒载体成功构建,可以满足脂联素基因研究和治疗的需要。
【关键词】 基因 脂联素 腺相关病毒
【基金】国家自然基金(30500644/C03050106) 湖南省自然科学基金(05jj30174)
【分类号】Q78
前言脂联素(adiponectin，Ac甲30)能改善胰岛素敏感性和脂质代谢、拮抗动脉粥样硬化的形成，且在肥胖及2型糖尿病患者尚未发现对脂联素的抵抗，脂联素已成为糖尿病防治研究的热点llJ]。腺相关病毒载体(adeno一associated virus，AAv)是目前基因治疗中采用的很有前景的载体系
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摘要目的：克隆大鼠脂联素基因(Acrp30)，并对载有脂联素的重组腺相关病毒(AAV)载体进行构建及鉴定。方法：根据Acrp30 的基因序列设计引物，上游引入EcoRⅠ位点，下游引入SalⅠ位点，以EX-A0242-M01- Acrp30 为模板扩增目的基因。将Acrp30 基因克隆入pUC19 载体中，获得重组质粒pUC19-Acrp30。然后用EcoRⅠ与SalⅠ酶切pUC19- Acrp30及质粒pSNAV，回收酶切片段，T4DNA连接酶16℃过夜，转化大肠杆菌DH5α 感受肽细胞，筛选阳性克隆获得pSNAV- Acrp30，EcoRⅠ/Sal 双酶切鉴定，并行全基因测序。结果：PCR电泳及酶切鉴定表明，pSNAV- Acrp30 重组成功，基因测序显示装入pSNAV 质粒中的Acrp30 基因正确。结论：脂联素病毒载体成功构建，可以满足脂联素基因研究和治疗的需要。
关键词：基因；脂联素；腺相关病毒
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