N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶活性位点的构成研究
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翁秋萍 李环 陆高圣 韦萍 南京工业大学制药与生命科学学院 南京工业大学制药与生命科学学院 南京工业大学制药与生命科学学院 南京工业大学制药与生命科学学院
【摘要】目的:用生物信息学软件预测出N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的活性中心的金属离子结合位点。方法:选用DEPC、WRK、PMSF、NBS、DTNB 5种化学试剂选择性修饰N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶中组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、色氨酸和半胱氨酸;同时考察Co~(2+)、Fe~(3+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Ni~(2+)、Cu~(2+)等金属离子对酶活性的影响。结果:在DEPC、WRK修饰后,酶的活力明显下降,而PMSF、NBS、DTNB对酶的活力影响不大;说明组氨酸和酸性氨基酸为酶活性中心的必需氨基酸,而丝氨酸残基、色氨酸残基、半胱氨酸残基不参与酶活性中心的组成;Co~(2+)对酶反应有促进作用,验证了生物信息学的预测结果;底物N-乙酰-D,L-蛋氨酸对酶有较好的保护作用,保护作用随浓度增加而增加。结论:本研究为深入研究酶结构与功能的关系提供实验依据,为N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的工业应用提供理论参考。
【关键词】 N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶 化学修饰 活性中心 底物保护
【基金】国家973课题资助(NO.2003CB7160004)
【分类号】Q55
引言大肠杆菌argE编码的N一乙酞鸟氨酸脱酞基酶(N一acetylornithine deaeetylase，NA0ase;EC3.5.l.16)催化N一乙酞鸟氨酸脱去乙酸基，生成L一鸟氨酸。该反应是精氨酸合成途径的关键，产物鸟氨酸是多胺类物质合成的前体，一3]。多胺与DNA复制及细胞分裂有关，故NAOase的活性对
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摘要目的：用生物信息学软件预测出N- 乙酰鸟氨酸脱酰基酶的活性中心的金属离子结合位点。方法：选用DEPC、WRK、PMSF、NBS、DTNB 5种化学试剂选择性修饰N- 乙酰鸟氨酸脱酰基酶中组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、色氨酸和半胱氨酸；同时考察Co2+、Fe3+、Mg2+、Mn2+、Zn2+、Ni2+、Cu2+等金属离子对酶活性的影响。结果：在DEPC、WRK修饰后，酶的活力明显下降，而PMSF、NBS、DTNB 对酶的活力影响不大；说明组氨酸和酸性氨基酸为酶活性中心的必需氨基酸，而丝氨酸残基、色氨酸残基、半胱氨酸残基不参与酶活性中心的组成；Co2+对酶反应有促进作用，验证了生物信息学的预测结果；底物N- 乙酰-D,L- 蛋氨酸对酶有较好的保护作用，保护作用随浓度增加而增加。结论：本研究为深入研究酶结构与功能的关系提供实验依据，为N- 乙酰鸟氨酸脱酰基酶的工业应用提供理论参考。
关键词：N- 乙酰鸟氨酸脱酰基酶；化学修饰；活性中心；底物保护
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