2种腺病毒介导的eGFP对人成纤维细胞转染效率的研究
人皮肤成纤维细胞,增强型绿色荧光蛋白,流式细胞
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郑钧丰 魏泓 孔永 葛良鹏 第三军医大学基础部实验动物学教研室 第三军医大学基础部实验动物学教研室 西南大学生命科学院 第三军医大学基础部实验动物学教研室
【摘要】目的:比较2种不同腺病毒(adenovirus,AD)介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)对人皮肤成纤维细胞(Human Fibroblast,HFB)的转染效率。方法:原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数MOI为10、25、50、100转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP对HFB的转染效率,荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT法检测AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP对HFB的毒性。结果:两种腺病毒对HFB的转染效率随着MOI增加而增高。AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP在MOI为10、25、50、100时转染效率分别为9.44+3.44%、31.96+11.19%、51.7+7.24%、69.99+3.26%和22.82+8.98%、55.08+2.19%、63.37+7.24%、88.63+2.58%。两种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论:AD5/F35载体对HFB嗜性显著高于AD5。在皮肤组织的基因修饰中,AD5/F35比AD5更具优越性。
【关键词】 腺病毒 人皮肤成纤维细胞 增强型绿色荧光蛋白 流式细胞
【基金】国家863计划项目(2006AA02A121)
【分类号】R346
前言目前基因治疗所应用的病毒载体主要包括逆转录病毒，腺病毒，腺相关病毒，慢病毒和疙疹病毒Ijj。腺病毒载体因具有感染效率和外源基因表达水平高、高滴度重组病毒的制备较简单、容量适合装载大多数外源基因等特点而被广泛用于基因治疗研究和临床试验中侧。通过靶向性腺病
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摘要目的：比较2 种不同腺病毒(adenovirus，AD)介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein ，eGFP)对人皮肤成纤维细胞(Human Fibroblast，HFB)的转染效率。方法：原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定，按照感染复数MOI为10、25、50、100 转染传2 代的人成纤维细胞，流式细胞检测AD5-EGFP 和AD5/F35-EGFP 对HFB 的转染效率，荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT 法检测AD5-EGFP 和AD5/F35-EGFP 对HFB 的毒性。结果：两种腺病毒对HFB 的转染效率随着MOI增加而增高。AD5-EGFP 和AD5/F35-EGFP 在MOI 为10、25、50、100 时转染效率分别为9.44+3.44%、31.96+11.19%、51.7+7.24%、69.99+3.26%和22.82+8.98%、55.08+2.19%、63.37+7.24%、88.63+2.58%。两种病毒在转染过程中，细胞生长正常，MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论：AD5/F35 载体对HFB 嗜性显著高于AD5。在皮肤组织的基因修饰中，AD5/F35 比AD5 更具优越性。
关键词：腺病毒；人皮肤成纤维细胞；增强型绿色荧光蛋白；流式细胞
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