肝素对逆转录抑制作用的研究
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王萍 蒋立虹 孟明耀 李亚雄 陈智豫 邹弘麟 侯宗柳 昆明医学院附属延安医院心胸外科;昆明医学院附属延安医院昆明医学生物学实验中心;
【摘要】目的:研究肝素在逆转录过程中的作用。方法:提取人肺胚胎二倍体细胞和肝素抗凝血中总RNA,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的质量好后,逆转录合成相应的cDNA,分别进行看家基因β-actin的聚合酶链反应(PCR),其产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测;用基因芯片技术检测cDNA。将肝素抗凝血中提取的总RNA分为等量的两部分,分别用肝素酶或氯化锂处理RNA进行逆转录为cDNA和RNA合成cDNA后再用肝素酶或氯化锂处理,分别进行看家基因β-actin的聚合酶链反应(PCR),其产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测;并用基因芯片技术检测氯化锂处理RNA后cDNA。结果:二倍体细胞来源的RNA为模板,能扩增出β-actin产物,并且在基因芯片上有杂交点。肝素抗凝血来源的RNA,在肝素酶或氯化锂作用后行逆转录者,能扩增到β-actin的目的片段,且基因芯片上有杂交点;而在未处理者不能扩增到目的片段,且基因芯片上无杂交点。结论:肝素是一种逆转录的抑制剂,对RNA逆转录cDNA过程有较强的抑制作用。
【关键词】 肝素 RT-PCR 基因芯片技术 逆转录
【基金】昆明市科技计划项目(04S06012-01)
【分类号】Q75
别青在现代临床研究和科研实验中，应用肝素抗凝血作为研究对象越来越普遍。如疾病相关基因的表达水平的研究，血液中RNA病毒的检测等，常从其提取RNA进行逆转录一聚合酶链反应(reverse transeription一pol卿erase chain reaction，RT一PCR)。Jung等发现，在临床肝素抗凝血中
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摘要目的：研究肝素在逆转录过程中的作用。方法：提取人肺胚胎二倍体细胞和肝素抗凝血中总RNA，经1 %琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的质量好后，逆转录合成相应的cDNA，分别进行看家基因β-actin 的聚合酶链反应(PCR)，其产物用1 %琼脂糖凝胶电泳检测；用基因芯片技术检测cDNA。将肝素抗凝血中提取的总RNA分为等量的两部分，分别用肝素酶或氯化锂处理RNA进行逆转录为cDNA 和RNA 合成cDNA后再用肝素酶或氯化锂处理，分别进行看家基因β-actin 的聚合酶链反应(PCR)，其产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测；并用基因芯片技术检测氯化锂处理RNA后cDNA。结果：二倍体细胞来源的RNA为模板，能扩增出β-actin 产物，并且在基因芯片上有杂交点。肝素抗凝血来源的RNA，在肝素酶或氯化锂作用后行逆转录者，能扩增到β-actin 的目的片段，且基因芯片上有杂交点；而在未处理者不能扩增到目的片段，且基因芯片上无杂交点。结论：肝素是一种逆转录的抑制剂，对RNA逆转录cDNA 过程有较强的抑制作用。
关键词：肝素；RT-PCR；基因芯片技术；逆转录
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