靶向性DNA甲基化酶在pET32a原核表达载体中的表达和鉴定
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吴琳 邢克飞 张治国 张健 刘新平 药立波 李福洋 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;第四军医大学预防医学系流行病学教研室;
【摘要】目的:在pET32a原核表达载体中表达融合myc-6his标签的靶向性甲基化酶B1-3a并进行鉴定。方法:以含有B1-3a基因的pcDNA4.0-B1-3a-myc-6his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc-6his标签序列的目的区段B1-3a,然后克隆入表达载体pET32a;以SDS-PAGE和Western blot方法对表达产物进行鉴定。结果:表达产物中在分子量43kD左右可见与目的蛋白分子量相符的条带,该条带可被6his标签单克隆抗体特异识别。结论:正确构建了靶向性甲基化酶B1-3a的原核表达载体,靶向性甲基化酶能够在pET32a中成功表达。
【关键词】 DNA甲基化酶 基因 靶向性 原核表达载体pETa
【基金】国家自然科学基金资助项目(30670453)
【分类号】Q78
前言致病基因的表达或细胞内某些基因的异常表达,是肿瘤和病毒感染的共同分子机制。选择性地关闭致病基因或异常表达的基因是治疗肿瘤和感染的主要策略之一,特异、有效的基因干预手段是实现该策略的决定性因素。D N A甲基化和基因沉默紧密相关[1]。D N A甲基化导致基因沉默的
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前言
致病基因的表达或细胞内某些基因的异常表达，是肿瘤和病毒感染的共同分子机制。选择性地关闭致病基因或异常表达的基因是治疗肿瘤和感染的主要策略之一，特异、有效的基因干预手段是实现该策略的决定性因素。
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