源于纤维单胞菌的聚阿拉伯糖内切酶的分离纯化
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张晓影 辛毅 大连医科大学;
【摘要】目的:分离纯化一种由纤维单胞菌属(Cellulomonose sp.)的细菌发酵产生的具有聚阿拉伯糖内切酶的性质的蛋白酶。方法:用薄板层析法(TLC)分离酶促反应的产物-寡糖,以Quanti-Scan软件计算薄板上条带的面积灰度值,以此定量,计算酶活力。用Bradford法测定蛋白含量。通过DEAE-Sepharose离子交换层析,SephacrylS-300分子筛和Blue-Dye活性染料亲和层析三种手段串联,对粗酶进行分离纯化,用SDS-PAGE测定纯度,SDS-PAGE和凝胶层析测定相对分子质量。结果:分离得到了电泳纯的阿拉伯糖内切酶,该酶的相对分子质量为45kD,蛋白酶比活性为15.42×10(3U/ug),纯化倍数为77.1。结论:该酶是一种阿拉伯糖内切酶,可以作为一种新型的工具酶,应用于结核分枝杆菌细胞壁的结构分析及寻找抗结核药物作用的靶点。
【关键词】 聚阿拉伯半乳糖 六聚阿拉伯糖 阿拉伯糖内切酶
【分类号】R914
前言近年来由于抗结核药物的使用不当[1],导致结核病的复燃。由于结核分枝杆菌具有独特的细胞壁结构,因此,细胞壁的主要组成成分及其代谢途径就成为新药研发的理想靶点[2]。聚阿拉伯半乳糖(A rabinogalactan,A G)是结核分枝杆菌细胞壁的重要组成部分[3]。由于A G是一个具有分
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前言
近年来由于抗结核药物的使用不当，导致结核病的复燃。由于结核分枝杆菌具有独特的细胞壁结构，因此，细胞壁的主要组成成分及其代谢途径就成为新药研发的理想靶点。聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan，AG)是结核分枝杆菌细胞壁的重要组成部分。
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