巢式甲基化特异性PCR检测不同类型组织标本中WIF-1基因启动子异常甲基化
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徐新娟 韩钰 丁文柏 盛德乔 陈世雄 曾凡军 高宝安 夏道奎 胡旭 张春芳 三峡大学第一临床医学院;三峡大学分子生物学研究所;三峡大学医学院生物化学教研室;
【摘要】目的:采用一种高灵敏度的DNA甲基化分析方法,即巢式甲基化特异性PCR法(nested-MSP,nMSP),检测外科手术切除新鲜组织、石蜡包埋组织及纤维支气管镜活检组织中WIF-1基因启动子的异常甲基化状态。方法:将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果:在3种类型的原发性非小细胞肺癌标本中都检测出了WIF-1基因启动子的异常甲基化。结论:巢式甲基化特异性PCR是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化的分析。
【关键词】 巢式甲基化特异性PCR(nMSP) WIF- 基因 甲基化
【基金】三峡大学博士研究启动基金(0620060087)
【分类号】R734.2:R394.2
前言肺癌是严重威胁人类健康的重大疾病,世界上肺癌已成为病死率第一位的恶性肿瘤。根据W H O估计,到2025年我国每年新增的肺癌病死例数将超过100万;到2030年全球每年将有1000万人死于肺癌。肺癌是预后最差的恶性肿瘤之一,虽经几十年的努力,投入大量的人力、物力到肺癌的诊治
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前言
肺癌是严重威胁人类健康的重大疾病，世界上肺癌已成为病死率第一位的恶性肿瘤。根据WH0估计，到2025年我国每年新增的肺癌病死例数将超过100万；到2030年全球每年将有1000万人死于肺癌。肺癌是预后最差的恶性肿瘤之一，虽经几十年的努力，投入大量的人力、物力到肺癌的诊治工作，但肺癌的总体5年生存率在美国仅为15%，我国则更低。要获得肺癌诊治的突破，从根本上说，需依赖于基础研究的深入和探索。近年来的研究显示肿瘤的发生与DNA甲基化模式的异常关系密切，CpG岛的异常甲基化是导致许多抑癌基因转录失活的一个重要机制。
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