小鼠amekobkastin基因重组慢性病毒表达载体的构建及表达
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摘要 目的：构建表达小鼠ameloblastin基因的慢性病毒表达载体，生产有感染及表达能力的病毒，为进一步研究ameloblastin基因在牙釉质形成中的功能奠定基础。方法：利用RT-PCR的方法从出生后1d钟状期小鼠牙胚组织total RNA中扩增ameloblastin编码区cDNA，并克隆到pcRII-TOPO载体中，再亚克隆到pNL-IRES2-EGFP中。将病毒三质粒系统转染293T细胞，收集病毒，并鉴定病毒感染及表达能力。结果：通过酶切和PCR的方法鉴定ameloblastin基因已成功的构建入慢性病毒表迭载体pNL-IRES2-EGFP中，经293T细胞生产的病毒感染人牙髓干细胞(DPSCs)，DPSCs有较强荧光发出，并可稳定表达ameloblastin基因。结论：成功的构建了慢性病毒表达载体，并获得有感染及袁达能力的病毒。
关键词：ameloblastin；载体构建；慢性病毒表达载体pNL-IRES2-EGFP；转染
中图分类号：Q784，Q786 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)10-1829-03
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