HPV18-E6基因SiRNA对喉癌细胞的生长抑制作用
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吴雅岚 张惠中 成诗银 第四军医大学唐都医院耳鼻喉科;第四军医大学唐都医院临床实验科;
【摘要】目的:探讨小分子干扰RNA(SiRNA)对喉癌细胞系Hep-2细胞中人乳头状瘤病毒HPV18型E6基因mRNA表达的干扰作用。方法:用Ambion公司pSilencer4.1CMV构建针对HPV18-E6基因的SiRNA真核表达载体,以携带HPV18-E6基因的人喉癌Hep-2细胞系为靶细胞,通过阳离子脂质体法转染SiRNA表达载体。RT-PCR分析转染后细胞HPV18-E6基因表达;Westernblot试验观察干涉后HPV18-E6蛋白的表达;流式细胞仪分析细胞增殖周期的改变。结果:成功构建了人HPV18-E6基因的RNA干涉真核表达载体psil-svvE6,并在Hep-2细胞中有效地发挥了对HPV18-E6基因表达的干涉作用。细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡。结论:HPV18-E6基因在喉癌细胞Hep-2生长中可能起到非常重要的作用,有望成为逆转喉癌细胞永生化的靶点。
【关键词】 HPV-E基因 SiRNA 喉癌 基因治疗
【基金】国家自然科学基金(30371445)
【分类号】R739.65
前言人乳头状瘤病毒(hum an papillom avirus,H PV)具有嗜上皮寄生的特性,可以整合的形式进入宿主的细胞中,引起细胞一系列增殖和转化的改变。其早期区域中的E6基因是其最主要的编码癌蛋白的癌基因之一,主要作用是导致P53抑癌基因的突变并可以与其蛋白产物P53结合,抑制其活性
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摘要 目的：探讨小分子干扰RNA(SiRNA)对喉癌细胞系Hep-2细胞中人乳头状瘤病毒HPV18型E6基因mRNA表达的干扰作用。方法：用Ambion公司pSilencer4.1CMV构建针对HPV18-E6基因的SiRNA真核表达载体，以携带HPV18-E6基因的人喉癌Hep-2细胞系为靶细胞，通过阳离子脂质体法转染SiRNA表达载体。RT-PCR分析转染后细胞HPV18-E6基因表达；Western blot试验观察干涉后HPV18-E6蛋白的表达；流式细胞仪分析细胞增殖周期的改变。结果：成功构建了人HPV18-E6基因的RNA干涉真核表达载体psil-svvE6，并在Hep-2细胞中有效地发挥了对HPV18-E6基因表达的干涉作用。细胞周期阻滞于GO/G1期，并诱导细胞凋亡。结论：HPV18-E6基因在喉癌细胞Hep-2生长中可能起到非常重要的作用，有望成为逆转喉癌细胞永生化的靶点。
关键词：HPV18-E6基因；SiRNA；喉癌；基因治疗
中图分类号：R739.65 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)10-1832-03
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